类风湿关节炎患者cd4+t细胞il-8基因调控序列dna甲基化状态研究

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1、硕士学位论文密级类风湿关节炎患者CD4+T细胞IL．8基因调控序列DNA甲基化状态研究DNAMethylationStatusoftheIL-．8GeneinCD4+TcellsinR血eumatoidArthritis作者姓名：学科专业：学院(系、所)：指导教师：谢硕珊内科学中南大学湘雅医院左晓霞教授论文答辩日期鲨牲国答辩委员会主席塑中南大学二零一二年五月一奄一一，平丑月7原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写

2、过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的资料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中做了明确的说明。作者签名：￥泣堕驾日期：迦!兰年!月鉴日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅或借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文，同时授权中国科学技术信息研究将本学位论文收录到中国学位论文全文数据库，通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：边笪丝骂导师

3、签名±鱼f日期：塑生年』月兰一日硕士学位论文中文摘要摘要目的：类风湿关节炎(RheumatoidArthritis，RA)是一种累及周围关节为主的多系统性炎症性的自身免疫性疾病。其发病机制不明，近年来，DNA甲基化已成为RA的研究热点。在参与RA发病的众多炎症因子中，见．8的表达异常已逐渐引起研究者的重视，但白细胞介素．8(Intertleukin-8，几．8)在RA中过度表达的机制目前尚不明确。本研究通过观察RA患者外周血也．8的表达水平及CD4+T细胞中几．8基因调控序列甲基化状态，探讨其与几．8基因表达水平的关系。方法：收集2009

4、年06月至2010年1月中南大学湘雅医院风湿免疫科门诊RA患者2l例，正常对照组15例。(1)检测RA患者血沉及C反应蛋白的水平；并对RA患者进行疾病活动度评估。(2)抽取RA患者及正常对照外周血60ml，密度梯度离心法分离RA患者、正常对照外周血单个核细胞，免疫磁珠分离外周血CD4+T细胞，提取CD4+T细胞DNA及RNA：①实时定量RT-PCR(real．time灯PCR)检测CD4+T细胞中Ⅲ．8的mRNA表达水平；②酶联免疫吸附方法(EUSA)检测血清中IL．8的蛋白水平；③亚硫酸氢钠测序法检测CD4+T淋巴细胞中儿．8基因调控区

5、域的甲基化状态。结果：0)RA患者CD4+T细胞中IL．8rnRNA表达水平较正常对本课题资助基金国家自然科学基金重点项目(30730083)国家重点基础研究发展计划(973计划)(2009CB825605)本课题在湘雅二医院表观遗传实验室完成硕士学位论文中文摘要照明显升高(P=-0．028)；蓬)ELISA结果显示RA患者血清中IL．8的蛋白水平较正常对照明显增加(氏O．01)，且与CRP浓度呈正相关(尸=O．016)，其中疾病活动组较非活动组外周血清IL．8蛋白水平明显增高(氏0．05)；③亚硫酸氢钠测序结果表明RA患者CD4+T细胞

6、中m．8基因调控区域的甲基化水平显著降低(P=-0．038)，有3个连续位点低甲基化有统计学意义(P值分别为0．014，0．021，0．013)，并与几．8的mRNA表达呈显著负相关(芦O．024)。结论：(1)RA患者外周血CD4+T细胞中几．8的mRNA表达量高于正常对照；(2)RA组外周血IL．8蛋白表达明显高于正常对照；(3)RA患者CD4+T细胞中IL．8启动子存在低甲基化，与几．8过表达密切相关。关键词类风湿关节炎，CD4+T细胞，几．8，甲基化硕士学位论文英文摘要ABSTRACTObjects：Rheumatoidarthr

7、itis(RA)isanautoimmunediseaseinvolvingperipheraljointswithmulti—systemicinflammatory．AbnormalDNAmethylationcontributestothedevelopmentofrheumatoidarthritis．Interleukin-8(IL-8)playsanimportantroleininflammatorydisease．However,themechanismsleadingtotheover-expressionofIL-8i

8、nRApatientsarenotwellunderstood．Inthisstudy,weinvestigatetheDNAmethylationstatusofregulatoryelem