生物样品中药物浓度的hplc-msms测定及其药代动力学研究

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1、南方医科大学2009级硕士学位论文生物样品中药物浓度的HPLC．MS／MS测定及其药代动力学研究DeterminationandPharmacokineticStudyofmedicineinbiologicalsamplesbyhighperformanceliquidchromatography—tandemmassspectrometry课题来源：自选课题专业名称学位申请入指导教师答辩委员会主席答辩委员会成员药物化学雷林生教授论文评阅人马安德教授陈怡禄教授2012年5月10日广州生物样品中药物浓度的HPLC．MS／MS测定及其药代动力学研究硕士研

2、究生1李国棵导师：杨雪梅副教授摘要目的建立专属、灵敏的高效液相色谱．串联质谱(HPLC．MS／MS)法测定人血浆中比伐卢定和人尿液中二甲双胍和罗格列酮的药物浓度，并研究其在人体内的药物动力学特点。方法(1)测定人血浆中比伐卢定的浓度：①样品处理方法：向0．20mL血浆中分别加入50灶甲醇，50肛L内标溶液(2．166pg／mL那法瑞林溶液)，涡旋30s混匀；加600灿甲醇，涡旋30s混匀：离心10min(13000rpm)，取上清液40"C氮气下吹干，残渣加入200I_tL乙腈：水(20：80，vM，涡旋30s混匀，取5此进样分析。②质谱分析：比伐卢定

3、和内标那法瑞林在正离子检测方式下，采用电喷雾电离源(ESI源)，主要生成【M+H】+准分子离子，分别为rrdz1091．0和m／z662．2。选择性对准分子离子[M+H】+进行产物离子全扫描分析，获得比伐卢定的主要碎片为m／z650．3，响应较强，比较稳定且背景噪音低，因而被选作多反应监测(MRM)定量的产物离子，用于定量分析。那法瑞林生成的主要碎片离子为m／z328．7，将m／z328．7作为定量分析时监测的产物离子。③色谱条件为：．本试验选定的色谱条件为：色谱柱：ZorbaxEclipseC18柱(50113111×2．1mlTlI．D，3．5pm

4、，美国安捷伦公司)；流动相：乙腈：0．2％甲酸=20：80(v／v)；流速：0．35中文摘要mL／min；柱温：40℃；进样量：5此。④受试者的选择：“申请药物临床试验报告、试验方案、健康志愿者知情同意书”经药品临床研究基地医学伦理委员会批准。选择健康志愿受试者30名，男女各半，年龄20～27岁，体重42"--70kg，签署知情同意书，于试验前在医院接受全面的体格检查，对肝、肾功能进行化验测定，并进行心电图检查，正常者方可入选。受试者无既往病史，平时很少服药，不嗜烟酒，试验前14天内未用任何药物。临床试验在医院进行，采血期间禁烟酒、咖啡因类饮料，避免剧

5、烈运动。⑤给药方案及样品采集：30名受试者按性别和登记顺序号分层随机分成低、中、高三组，每组各10人(男女各半)，晚上统一进清淡饮食，于试验前一天晚8：00开始禁食，次日早上统一清淡饮食后，低、中、高剂量组受试者分别静脉推注0．25mg／kg、0．Smg／kg、1．0mg／kg比伐卢定注射液，服药后2h内不得饮水，不得卧下，服药后2h可饮水，4h后统一进标准餐(低脂肪饮食)。分别于注射前(Oh)和注射后0．083、O．167、0．25、0．5、O．75、l、1．5、2、3、4、5h肘静脉采血4mL，采集的血样置于肝素化的试管中，3000rpm离心10m

6、in，分离血浆置．70"C储藏，用于血药浓度检测。⑥血浆样品分析：未知血浆样品的测定按“血浆样品的分析方法”项下操作，每天建立一条标准曲线，同时分析低、中、高(双样本)的质控样品，并以同批的标准曲线计算各时间点样品中比伐卢定浓度和质控样品的浓度，由QC样品的结果决定当日数据的取舍，QC样品的相对偏差应在4-15％范围之内。⑦数据处理：将各受试者不同时间样品的血药浓度数据及平均值与标准差列表并作图；然后分别对每个受试者的血药浓度数据进行处理，进行有关药代动力学参数求算，并求出参数的平均值和标准差。Tmax、Cmax采用实测值；AUC0-t用梯形法计算；A

7、UC0-oo=AUC0-t+Ct／ke(ke是末端消除速率常数)；tl／2按tl／2=0．693／ke求出；ke用对数血药浓度一时间曲线末端直线部分的斜率求得。(2)测定人尿液中二甲双胍和罗格列酮浓度：①样品处理方法：向O．20mL待测尿液中分别加入50pL甲醇，50I．tL水，50I-tL内标溶液(2．6699／mL苯乙双胍水溶液)，涡旋30s混匀；加400I-tL0．1％甲酸的乙腈溶液，涡旋30s混匀；离心15min(13000rpm)，取上清液700}-tL加入水6009L，涡旋30s混匀，取5此H硕士学位论文进样分析。②质谱分析：二甲双胍、罗格

8、列酮和内标苯乙双胍在正离子检测模式下，采用ESI源，主要生成【M+H】+准分子离子，分别为m／