无血清悬浮培养乳腺癌细胞系并对其干细胞亚群相关基因表达差异作初步研究

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1、徐州医学院硕士学位论文无血清悬浮培养腺癌细胞系并对其干细胞亚群相关基因表达差异作初步研究姓名：张洁申请学位级别：硕士专业：肿瘤学指导教师：杜秀平；韩正祥2012-03徐州医学院硕士学位论文无血清悬浮培养乳腺癌细胞系并对其干细胞亚群相关基因表达差异作初步研究中文摘要目的研究无血清培养基悬浮培养MCF．7和№A．Ⅷ．231细胞系，筛选出细胞系中的干细胞相关亚群，并研究乳腺癌干细胞相关基因在2种乳腺癌细胞系及干细胞亚群中的表达差异。方法本实验利用有血清贴壁和无血清悬浮这两种体外细胞培养方法，培养MCF．7和MDA-MB．231细胞，扩增出贴壁细胞和悬浮细胞球两种肿瘤细胞。通过无血清悬浮培养筛选出乳

2、腺癌细胞系中肿瘤干细胞相关亚群。流式细胞仪检测MCF．7贴壁及悬浮球细胞、MDA．MB．231贴壁及悬浮球细胞中CD44+CD24。、cDl33+表型细胞比例的变化。RT-PCR检测MCF．7贴壁及悬浮球细胞，MDA．MB．231贴壁及悬浮球细胞中乳腺癌干细胞相关基因CD44、CD24、CDl33、ALDH3A1、EPCAM、CXCIH、ABCG2、PROCR的表达状况。结果1．细胞微球体培养观察：细胞在干细胞培养基中培养，大多呈悬浮生长，培养第三天就可见由3．10个细胞形成的微球体，培养6．7d后形成许多约100岬的微球体。收集微球体细胞消化后进行第二代微球体培养，形成微球体的速度较第一代

3、稍快，且微球体的体积稍大；可连续传代5次，仍有微球体形成。2．细胞微球体形成效率观察：MDA．MB．231细胞微球体形成效率为(3．21土O．20)％，高于MCF一7细胞(2．1钍O．30)％，PD．D5。MDA．MB．231微球体细胞的CD44+CD24。仃ow比

4、例为(12．10％士5．21％)，低于其贴壁培养细胞(86．27％士5．44％)，P

5、Dl33、ABCG2、EPCAM、CXCR4、AU)H3A1mRNA，分别上调了约3．2、13．2、14．6、2、3．2、4．4倍，P

6、1富集了CDl33+表型的肿瘤干细胞。4．两种乳腺癌细胞系的微球体细胞分别较其较贴壁细胞的乳腺癌干细胞相关基因表达部分存在差异。5．两种乳腺癌细胞系微球体细胞的部分乳腺癌干细胞相关基因的表达存在差异，推断不同分子亚型的乳腺癌干细胞的来源不同。关键词无血清悬浮培养；乳腺癌干细胞；干细胞表面标志物徐州医学院硕士学位论文PreHminarystudyofmaintaininginnoating—culturesysteminhumanbreastcancerceUlineandscreeningthedif&rentexpressionOfcancerstemceIlsmakergeneAbstr

7、actobjective’r0eIl五chbreastcancerst锄cellsofMCF-7andMDA—MB一23lbreastcancercellsnlroughcllltuljIlgmammospheres，aIldtodetectmegeneofbreastcancerStemcellsmakersr印oniI冯expression．MetllodsThiseXperiInentusing铆。虹n