慢病毒介导的shrna抑制nav1.7基因表达在大鼠骨癌痛研究中的应用

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1、苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：查!枣日期：，亭?!三：窒苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学短论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献

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3、表达变化和脊髓胶质细胞活化目的观察骨癌痛大鼠背根神经节(DorsalRootGanglion，DRG)部位Navl．7表达变化和脊髓胶质细胞的活化情况。方法30只雌性SD大鼠，体重180～2209，随机分为3组：正常组(N组，n=6)，假手术组(Sham组，n=6)和模型组(Ca组，n=18)。正常组不做处理，假手术组和模型组大鼠分别于左胫骨近端骨髓腔注射生理盐水或Walker256乳腺癌细胞(1×107／m1)10M1。三组均在建模前、建模后第3、6、9、12d测定大鼠左后肢机械缩足阈值(MechanicalWithdrawalThreshold，MWT)，正常组和假手术组

4、大鼠于建模后第18d处死，模型组于建模后第8、12、18d各处死6只大鼠，取DRG和L4～6脊髓组织，用RT-PCR和Western-Blot方法检测大鼠DRG部位Nayl．7和脊髓GFAP(星形胶质细胞激活标志)、OX42(小胶质细胞激活标志)的表达变化情况。结果建模后6～12d，模型组大鼠左后肢机械缩足反射阈值显著下降，且呈时间依赖性进展；建模后第8d，DRG部位Navl．7的转录和蛋白水平显著增高(P<0．05)，12d、18d继续增高(JP

5、显著增高(P

6、、LV-830、LV-3291)，体外转染经NGF诱导的PCI2细胞。荧光显微镜下观察转染效率，96h后分别收集细胞行RT--PCR和Western-Blot检测Navl．7基因及蛋白的变化。结果所构建的载体均可有效转染PCI2细胞，转染率达到85％。其中慢病毒载体LV-3291在96h时可以显著抑制Navl．7基因的mRNA水平及蛋白表达(P

7、的影响目的在骨癌痛早期予以鞘内注射Navl．7的shRNA慢病毒载体，观察其对骨癌痛大鼠的影响。方法54只雌性SD大鼠，体重180～2209，随机分为3组：癌痛+PBS组(Vehicle组，n=18)，癌痛+空病毒组(LV-GFP组，n=18)，癌痛+Navl．7shRNA慢病毒载体组(IV斟avl．7组，n=18)。建模后第4d，Vehicle组鞘内注射10ulPBS，LV-GFP组和I：v-NaVl．7组分别鞘内注射空病毒和LV-3291慢病毒液10}tl。建模后第3、6、9、12、18d测定大鼠左