小麦核糖体蛋白l5基因的克隆及其在籽粒灌浆与胁迫条件下的表达

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1、河南农业大学硕士学位论文小麦核糖体蛋白L5基因的克隆及其在籽粒灌浆与胁迫条件下的表达姓名：彭慧芳申请学位级别：硕士专业：作物栽培学与耕作学指导教师：郭天财；康国章2012052012年河南农业大学硕士学位论文摘要根据前期小麦冻害基因芯片的结果，发现一条EST(Expressedsequencetags)(BJ308939)在一50C低温冻害胁迫后其表达量显著上升，且此序列与拟南芥的AtL5基因序列有中度相似性，此EST序列可能为小麦工5基因的部分片段，推测其在小麦受冻胁迫响应中发挥着重要作用。本文以此EST序列为基础，

2、采用eDNA末端快速扩增法(Rapid．amplificationofcDNAends，RACE)，首次克隆出小麦三5基因(命名为TaL5)的eDNA全长，其长度为1158bp，开放阅读框(Openreadingframe，ORF)为906bp，5’．和3'-UTR长度分别为76bp和176。bp。该基因编码301个氨基酸，包含一个由74个氨基酸组成的5SrRNA结合域，且与其他高等植物中L5蛋白的氨基酸序列高度同源，由此证明，所克隆的基因确为小麦三5基因。TargetP软件预测结果表明，TaL5蛋白定位于线粒体内，5

3、’端包含一个由12个氨基酸的引导肽。本文进一步克隆出了TaL5基因的DNA序列，它的长度为2174bp，包含8个外显子和7个内含子。利用半定量PCR，发现在小麦籽粒灌浆期，TaL5基因的转录水平变化与淀粉积累速率基本一致；此外，当小麦幼苗受盐、干旱、冻害等逆境胁迫及激素脱落酸ABA和水杨酸(SA)等处理后，TaL5基因的转录水平显著上升。由此表明，TaL5基因可能在小麦生长发育及非生物胁迫应答中起重要作用。关键词：小麦、L5基因、克隆、表达、胁迫彭慧芳：小麦核糖体蛋白L5基因的克隆及其在籽粒灌浆与胁迫条件下的表达CLo

4、NINGRIBoSoMLUJ15GENEANDITSEXPRESSIONPATTERNSoNTHEGRAINFⅡJLINGSTAGEANDI肿ERSTRESSESINCo删ONWHEAT(TriticurnaestivumL．)Supervisor：Prof．GuoTiancaiAssociateProf．KangGuozhangMasterCandidate：PengHuifangABSTRACT：Inthepreviousstudiesofourlab，wheatseedlings(wheatcultivar“Yu

5、mai34”)weresufferedfrom—oCfreezestressfor3d．RNAofwheatleavesassayedattwotimepoints(1dayand3day)after一5"CfreezestresswasextractedfortheAffymetrixWheatGeneChipmicroarray．After1and3daysoffreezestress．600genesthatwerepreviouslyannotatedasshowingchangesinexpressionof

6、atleastthantwo—foldweremeasuredatoneorbothofthetimepoints．However，thetranscriptlevelsofmoreESTsequenceswerechangedunderfreezestresscondition．Inthepresentstudy，oneEST，whosetranscriptlevelincreased1and3daysafterfreezestressandwhoseaminoacidsequencehadmoderatesimil

7、aritytoAtL5，waschosentoisolateitsfulleDNAlengthusingRACEmethod．Theresultsindicatedthattheamplifiedfull—lengtheDNAsequencewas158bp，designatedasTaL5．Itcontainedtheopenreadingflame(ORF)of906bp(theregionfrom77to982nucleotides)，flankedby5’-and3'-untranslatedregionsof

8、76bpand176bp，respectively．Thededucedaminoacidsequence(301residues)sharedhi【ghsimilaritytothoseofotherhigherplantL5proteins．TaL5DNAsequencewasfurthercloned，andsequence