嗅鞘细胞抑制rcs大鼠müller细胞胶质增生的分子机制研究

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1、第三军医大学硕士学位论文嗅鞘细胞抑制RCS大鼠Müller细胞胶质增生的分子机制研究姓名：谢晶申请学位级别：硕士专业：眼科学指导教师：阴正勤201205第三军医大学硕士学位论文嗅鞘细胞抑制RCS大鼠Miiller细胞胶质增生的分子机制研究木摘要原发性视网膜色素变性(Retinapigmentosa，RP)是一种目前临床上尚无有效治疗方法的严重致盲眼病。视网膜中最主要的神经胶质细胞一Mnller细胞在这种病变过程中逐渐肥大、排列紊乱，与视网膜下腔无法正常降解的外节盘膜碎屑共同构成“胶质封闭”(glialseal)，致使营养物质无法从脉络

2、膜运输至视网膜，从而引起光感受器细胞的逐渐变性乃至凋亡。近年来发现在嗅觉系统中存在一种特殊类型的神经胶质细胞，称为嗅鞘细胞(OlfactoryEnsheathingCell，OECs)，中枢神经损伤后移植混合的OECs和嗅球成纤维细胞(Olfactorynervefibroblasts，ONFs)，能够抑制胶质瘢痕，促进神经轴突再生。因此，本实验室选择了与RP病变过程相类似的皇家外科学院大鼠(RoyalCollegeofSurgeonrat，RCSrat)作为研究对象，将OECs移植入视网膜下腔，针对OECs对Mtiller细胞胶质增

3、生的影响进行研究。在前期研究中我们观察到：1．RCS—P+大鼠视网膜下腔移植OECs后，OECs能沿视网膜下腔及视网膜各层迁移。2．OECs移植后MUller细胞神经胶质纤维酸性蛋白(Glialfibrillaryacidicprotein，GFAP)的表达明显下降。3．OECs移植后RCS大鼠ERGb波幅值较对照组升高。这些实验结果提示：OECs在变性视网膜中同样具有抑制“胶质封闭”形成的作用。那么，移植至视网膜下腔的OECs如何降解视网膜下腔堆积的外节盘膜碎屑而在视网膜内迁移?迁移进入视网膜中的OECs与变性视网膜MUller细胞

4、如何相互作用?OECs又是通过何种途径抑制Mtiller细胞胶质增生?尚有待进一步研究解决。在中枢神经损伤修复的研究中发现，OECs在中枢神经系统中迁移可能与释放MMPs有关。基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases，MMPs)是锌离子依赖性内切蛋白水解酶家族，具有高度保守性，能通过降解细胞外基质(Extracellularmatrix，ECM)发挥组织重构、新生血管生成、神经发生等作用，也可以促进肿瘤细胞的浸润和转移。因此，在RCS—P+大鼠视网膜下腔移植OECs后，OECs可能通过分泌MMPs在视网膜下腔及

5、视网膜各层中迁移。Notch—Delta是一个在生物进化过程中古老而保守的信号传导系统，具有重要的作{本课题获国际重大合作项目(30910103913)资助第三军医大学硕士学位论文用。主要通过相邻细胞间的受体配体结合，实现细胞内信号转导和细胞核内转录，进而精确调控组织和细胞向不同方向分化。OECs移植后，同为神经胶质细胞的OECs与变性视网膜MOiler细胞是否通过Notch—Delta信号相互抑制，目前尚未见报道。因此，我们假设：RCS大鼠视网膜下腔移植OECs后，OECs可能通过分泌MMPs迁移进入宿主视网膜与MOiler细胞相互

6、接触，通过下调Notch．Delta信号通路抑制MOiler细胞胶质增殖反应。针对上述假设，进行如下研究：1．OECs分离白成年RCS—rdy+-P+(RCS。P+对照正常鼠)大鼠嗅球并进行原代培养，利用免疫细胞化学、ELISA等实验方法检测OECs在体外培养和在宿主体内MMPs家族分子的表达与分泌，并在不同时间点观察MMPs含量的变化。2．观察OECs移植对RCS大鼠视网膜Mtiller细胞胶质增生的特异性指标GFAP表达变化：激光共聚焦显微镜观察不同时间点OECs在宿主视网膜中的迁移情况及与MOiler细胞的相互作用方式。3．利用

7、免疫细胞化学、荧光定量PCR(RTFQ—PCR)等实验方法分别检测OECs以及RCS大鼠病变过程中MOiler细胞Notch家族及其配体表达情况；并检测OECs移植后，对RCS大鼠视网膜Notch受体及其配体表达的影响。本研究主要结果如下：1．OECs在移植前后均能表达并分泌MMP一2／MMP．3：原代培养RCS．rdy+一P+大鼠嗅球来源的OECs，应用免疫细胞化学方法和ELISA方法，检测MMPs的表达与分泌以及在移植后不同时间点MMPs含量的变化。结果发现，(1)原代培养的RCS—rdy+一P+大鼠嗅球来源的OECs具有表达MM

8、P一2／MMP一3的能力。(2)OECs培养液上清MMP一2／MMP一3含量在培养后5天与普通培养基无明显统计学差异(P>O．05)，8天高于普通培养基(P