口服卡介苗多糖核酸治疗哮喘大鼠免疫调节作用研究

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1、分类号学校代码10542密级学号200922024025口服卡介苗多糖核酸治疗哮喘大鼠免疫调节作用研究TheeffectoforaladministrationofBCG-·PSNonimmunoloregulationintheasthmaticrat论文编号湖南师范大学学位评定委员会办公室二零一二年四月摘要口服卡介苗多糖核酸治疗哮喘大鼠的免疫调节作用研究目的：建立大鼠慢性哮喘模型的基础上观察口服卡介苗多糖核酸(BCG-PSN)干预后哮喘大鼠气道炎症、气道高反应性、脾脏CD4+CD25+Treg细胞数目、外周血清中IL-4和IFN_Y含

2、量及肠粘膜sI酣含量的变化，探讨口服BCG-PSN防治哮喘的可行性及免疫调节作用。方法：1．取雄性成年SD大鼠(体重160±209)50只，分为五组：对照(Contr01)组、模型(Model)组、口服卡介苗(BCG)组、口服BCG—PSN组即BCG-PSN(A)组和肌注BCG-PSN组即BCG-PSN(B)组，各组10只。2．除Control组以外的其余四组大鼠分别于实验第1天和第15天腹腔注射10％OVA混合液lml(含OVAlOOmg、氢氧化铝lOOmg)致敏。第21天后再进行激发，2％OVA2ml泵雾化吸入，每周3次，激发连续9周

3、，构建大鼠慢性哮喘模型，Control组致敏和激发均以生理盐水代替。3．药物干预从实验的第1天起开始，BCG组予BCG灌胃(50ug／次，2次／周，12周)；BCG—PSN(A)组予BCG—PSN灌胃(250ug／kg·次，2次／周，12周)；BCG—PSN(B)组予BCG—PSN肌注(45ug／kg·次，2次／周，12周)。4．末次激发24小时内麻醉动物，气管插管后行气道高反应性(airwayhyperresponsiveness，AHR)检测；制备脾细胞悬液，通过流式细胞学检测脾脏CD4+CD25+Treg细胞数目变化，了解BCG-P

4、SN对调节性T细胞的影响；采用ELISA法检测外周血清中IFN-Y和IL一4及肠道粘膜sI舭的含量，明确口服BCG-PSN对THl／TH2细胞因子平衡及局部黏膜免疫的调节情况；腹主动脉放血处死大鼠，取各组动物BALF测定炎性细胞总数和EOS百分比，并行肺脏组织病理学检查。结果：1．大鼠慢性哮喘模型的建立：与Control组相比，在激发过程中，Model组大鼠逐渐出现烦躁不安、呼吸急促、挠鼻、发绀、活动进食减少或俯卧不动、出现竖毛、毛发失去光泽甚至脱毛、反应迟滞等哮喘样表现；同时Model组大鼠动物气道高反应性测定显示气道阻力明显增高，与C

5、ontrol组比较，差异有统计学意义(P<0．05)，且肺组织病理显示：Model组气道周围有大量炎症细胞浸润，支气管管壁增厚、管腔狭窄，气道上皮细胞脱落，粘液分泌明显增加。BALF细胞学显示炎性细胞总数及EOS百分比与Control组比较明显增加(P<0．05)，提示哮喘大鼠模型复制成功。2．各组大鼠气道高反应性值变化：各组大鼠用盐酸组胺激发，盐酸组胺浓度从0．32mg／ml起，Model组、BCG组、BCG-PSN(A)组和BCG—PSN(B)组气道阻力均明显高于Control组(P<0．05)，差异有统计学意义。而组胺浓度从0．64

6、mg／ml起，BCG-PSN(A)组气道阻力明显低于Model组(P<0．05)，差异有统计学意义；但明显高于BCG-PSN(B)组(P<0．05)，差异有统计学意义，而与BCG组相比差异无统计学意义(D0．05)。3．各组大鼠病理组织学变化：Model组气道周围炎症改变明显、支气管管壁增厚、管腔狭窄，气道上皮细胞脱落，粘液分泌明显增加。BCG-PSN(A)组、BCG组及BCG-PSN(B)组与Model组相比，气道周围炎症明显减轻，气道周围炎症细胞浸润、气道分泌物减少、支气管壁增厚及上皮细胞脱落现象明显改善。4．BALF细胞学变化：BC

7、G-PSN(A)组炎性细胞总数及EOS百分比明显低于Model组(P<0．05)，但明显高于BCG-PSN(B)组(P<0．05)，差异有统计学意义；而与BCG组相比差异无统计学意义(D0．05)。II5．外周血清中IFN-Y、IL-4含量：致敏、激发后Model组血清中IL-4的含量较Control组明显升高(P

8、N-Y含量明显低于BCG-PSN(B)组(PO．05)。而BCG—PSN(A)组、BCG组与BCG—PSN(B)组三者之间血清IL-4的含量