利用dsrna诱导蚜虫传毒相关蛋白基因沉默以阻断马铃薯y病毒传播的研究

《利用dsrna诱导蚜虫传毒相关蛋白基因沉默以阻断马铃薯y病毒传播的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、十I初大学②硕士学位论文利用dsRNA诱导蚜虫传毒相关蛋白基因沉默以阻断马铃薯Y病毒传播的研究作者姓名：学科专业：学院(系、所)：指导教师：高阳植物病理学隆平分院张德咏研究员中南大学二。一二年四月分类号UDC硕士学位论文密级利用dsRNA诱导蚜虫传毒相关蛋白基因沉默以阻断马铃薯Y病毒传播的研究ThestudyofusingdsRNAtoinducethegeneofviralbindingproteinofAlyzuspersicaesilenceinordertostopthetransmissionofPVY作者姓名：高阳学科专业

2、：植物病理学学院(系、所)：隆平分院指导教师：张德咏研究员论文答辩Et期2Q12生Q主旦3Q目答辩委员会主席一中南大学二。一二年四月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在在论文中作了明确的说明。作者签名：薹壹璺日期：：2Q12年上月j立日关于学位论文使用授权说明本人了解中南大学有关保留、使用学位

3、论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。摘要大部分植物病毒通过与其传播介体互作而实现水平传播。烟蚜(Myzuspersicae)RPS2蛋白是一种核糖体蛋白，研究证实，RPS2在烟蚜传播马铃薯Y病毒时起了重要作用。利用GenBank查找已报道的烟蚜RPS2蛋白序列，进而得到烟蚜RPS2基因序列，根据实验目的设计引物，通过RT．PCR技术，扩增得到了烟蚜RPS2基因的eDNA全长序列。将

4、烟蚜I冲S2基因的eDNA全长序列连接到PGEM．TeasyVector上并转入大肠杆菌(E．coli)NM522菌株中扩增并保存，再以RPS2基因的eDNA全长序列为模板，分别设计用于扩增RPS2基因全长序列的前段、中段和末段三个不同片段的引物，PCR扩增得到三段RPS2基因的部分片段，分别命名为RPS2．1、RPS2．2和RPS2．3。同时为了构建载体在三个片段两端分别引入不同的酶切位点，RPS2．1片段的5’端和3’端分别引入了EeoRI和HindIII两个限制性内切酶位点，而RPS2．2和RPS2．3两个片段的5’端和3’端分

5、别引入了EcoRI和BamHI两个限制性内切酶位点。通过酶切、连接等常用的分子实验方法，将三个片段分别连接到LITMUS．28i质粒上，构建成三个含RPS2基因片段的dsRNA原核表达载体。载体通过PCR，酶切以及测序等方法进行验证，结果表明构建的重组载体与预期相同。将三种重组载体分别转化到大肠杆菌(E．coli)HTl15(DE3)菌株内，由于LITMUS．28i质粒上存在两个反向的T7启动子，同时大肠杆菌菌株HTl15是RNA酶III缺陷型菌株，因此经过IPTG诱导，大肠杆菌菌株HTll5的细胞内可以自行表达dsRNA并可以通过C

6、TAB法提取到。提取到片段的大小、DNase和RNaseA酶切的结果都能证实，该载体可以表达预期的dsRNA。将这三种体外表达的dsRNA加入烟蚜人工饲料中，证明食用该饲料对烟蚜生长发育并无影响。以上实验为评价这三种dsRNA对烟蚜传播PVY的影响奠定了基础。关键词马铃薯Y病毒，双链RNA，烟蚜，人工饲养，传毒ABSTRACTPlantviruscantransformbyvictorthroughinteraction．TheproteinI冲S2ofMyzuspersicaeiSaribosomalprotein．andhasbe

7、encomfirmedthatitisusefulfor尸D缸幻HrusYtransmissionbyMyzuspersicae．UsingtheGenBanktofindtheproteinsequenceofRPS2thathavebeenreportedinMyzuspersicae，andthengetthegenesequenceofRPS2inMyzuspersicae．Primersweredesignedbasedontheexperimentalpurp-oses，amplifiedthecompletesequen

8、cesofI心S2genebyRT-PCR．Conne-ctedthecompletesequencesofI冲S2tothePGEM．TeasyvectorandtransformedintoEscherichiaco