紫外分光光度法测定水中总酚的含量

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1、实验十紫外分光光度法测定水中总酚的含量一、实验目的1．掌握紫外分光光度法测定酚的原理和方法。2．掌握应用紫外分光光度计进行定量分析的方法和基本操作。二、实验原理苯酚是工业废水中的一种有害物质，如果流入江河，会使水质受到污染，因此在检测饮用水的卫生质量时，需对水中酚含量进行测定。苯具有环状共轭体系，由π→π*跃迁在紫外吸收光区产生三个特征吸收带：强度较高的E1带，出现在180nm左右；中等强度的E2带，出现在204nm左右；强度较弱的B带，出现在255nm。有机溶剂、苯环上的取代基及其取代位置都可能对

2、最大吸收峰的波长、强度和形状产生影响。具有苯环结构的化合物在紫外光区均有较强的特征吸收峰，在苯环上的部分取代基（助色团）使吸收增强，而苯酚在270nm处有特征吸收峰，在一定范围内其吸收强度与苯酚的含量成正比，符合Lambert-Beer定律，因此，可用紫外分光光度法直接测定水中总酚的含量。三、仪器与试剂紫外可见分光光度计，石英比色皿（1cm）2个，50mL容量瓶，移液管等。苯酚标准溶液250mg·L-1：准确称取0.0250g苯酚于250mL烧杯，加20mL去离子水溶解，移入100mL容量瓶，用去离

3、子水定容至刻度，摇匀。四、实验步骤1．标准系列溶液的配制取5只50mL容量瓶，分别加入2.00，4.00，6.00，8.00，10.00mL浓度为250mg·L-1的苯酚标准溶液，用去离子水稀释至刻度，摇匀。计算其浓度（mg·L-1）。2．吸收曲线的测定取上述标准系列中的任一溶液，用1cm石英比色皿，以溶剂空白（去离子水）作参比，在220～350nm波长范围内，扫描绘制吸收曲线。3．标准曲线的测定选择苯酚的最大吸收波长（λmax），用1cm石英比色皿，以溶剂空白（去离子水）作参比，按浓度由低到高顺序

4、依次测定苯酚标准溶液的吸光度。4．水样的测定在与上述测定标准曲线相同的条件下，测定水样的吸光度。五、数据记录与处理1．以吸光度为纵坐标，波长为横坐标绘制吸收曲线，找出最大吸收波长λmax，并计算其εmax。2．以吸光度为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。然后，根据水样吸光度在标准曲线上查出相对应的浓度值，计算出水样中苯酚的含量（g·L-1）。六、思考题1．紫外分光光度法与可见分光光度法有何异同？2．紫外分光光度计与可见分光光度计的仪器部件有什么不同？3．在用分光光度计进行定量分析时，哪些操

5、作可能影响测定结果的准确性？附：PELambda35紫外光谱仪使用操作指南1、开机确认仪器比色槽为空，打开主机电源，预热10min。开启电脑，进入Win98系统，然后启动Lambda35控制软件，进入界面。2、扫描吸收曲线在“Methods”界面中选择“Scan”选项卡，双击打开“yh-00.MSC”方法文件。点击工具栏上的“Start”按钮，稍等，屏幕提示放入空白溶液。在外侧比色槽中放入装去离子水的比色皿，合上仓盖，点击“确定”。稍等一会儿，屏幕提示放入样品“V-01”，打开仓盖，取出去离子水的比

6、色皿，放入另一装有需进行波长扫描的样品溶液比色皿，合上仓盖，点击“确定”，即开始波长扫描。从Graph1窗口中可查看所得扫描曲线，找出最大吸收波长。3、标准曲线和样品溶液的测定回到“Methods”窗口，选择“Conc”选项卡，从给出的方法文件中双击打开“yh-00.MCO”文件，设置测定波长，标准溶液的浓度等参数。点击工具栏上的“Start”按钮，稍等，屏幕提示放入空白溶液。空白校正后，按照提示，依次放入A01、A02、A03、A04、A05标准溶液和样品溶液进行测定。从结果显示窗口可读取相应的吸

7、光度数值，并可查看标准曲线。4、测量完毕，将容量瓶带回实验室清洗干净。