紫外分光光度法测定荷叶总黄酮含量

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1、万方数据第32卷第2期2008年4月南昌大学学报(理科版)JournalofNanehangUniversity(NaturalScience)V01．32No．2Apr．2008文章编号：1006—0464(2008)02—0148—03紫外分光光度法测定荷叶总黄酮含量邓胜国1，邓泽元n，范亚苇(南昌大学食品科学教育部重点实验室，江西南昌330047)摘要：芦丁为标准品，采用紫外分光光度法测定荷叶总黄酮的含量。实验结果表明：芦丁的线性范围为10一50斗g／mL，回归方程为A=32．357×C一0．0064，相关系数R=0．9998，平均加样回收率为99．5％，相对标准偏差为1

2、．72％。此法操作简便，准确可靠，可作为荷叶类保健食品的质量评价方法之一。关键词：荷叶；黄酮；芦丁；紫外分光光度法中图分类号：0657．32文献标识码：A荷叶属睡莲科植物(NelumboNuxiferaGaerth)的叶片，分布于我国大部地区(湖南、湖北、浙江、江苏等)。《本草纲目》载“荷叶服之，令人瘦劣。”近年来，随着人们对荷叶保健功能及药理作用的深入研究，发现荷叶类黄酮是非常有效的活性成分。它具有解暑清热、生发清阳、散瘀止血等功效，已成为研究、利用的热点¨一J。目前大都采用硝酸铝(氯化铝)比色法来测定荷叶类黄酮的含量，但该法的测定易受杂质干扰，定量测定误差大"‘6J。而采用

3、紫外分光光度法测定黄酮，则迅速简便，不消耗样品且灵敏度高、重现性好。故本实验采用紫外分光光度法测定荷叶中类黄酮的含量，为合理开发利用荷叶资源提供理论依据和检测手段。1材料与仪器1．1实验材料及试剂荷叶(江西瑞金产)，芦丁标准品(色谱纯)，AB一8大孔吸附树脂(南开大学化工厂)，乙醇(AR)，其他试剂均为分析纯。1．2主要仪器及设备手提式高速中药粉碎机(温岭市大德中药机械有限公司)，旋转蒸发仪(巩义市英峪予华仪器厂)，HH—S型恒温水浴锅(巩义市英峪予华仪器厂)，HL一2型恒流泵(上海青浦沪西仪器厂)，BSZ一自动部分收集器(上海青浦沪西仪器厂)sP一1910UVPC双光束紫外可

4、见分光光度计(上海光谱仪器有限公司)，索氏提取装置等。2实验方法2．1荷叶类黄酮的提取将已经烘干的荷叶粉碎，加入正己烷，80℃索氏抽提6h至回流液无色，除去脂肪后的荷叶粉放人通风橱中风干，待用。称取一定量的荷叶粉，与一定浓度的乙醇(95％，V／V)}昆合、搅拌均匀，恒温水浴浸提后真空抽滤，滤渣再用相同浓度的乙醇第二次提取，过滤，合并滤液。提取液经浓缩后，上AB一8树脂柱，分别用蒸馏水和70％的乙醇(v／V)洗脱，醇洗部分经浓缩定容至一定的体积，4℃冷藏待用。2．2荷叶黄酮含量的测定2．2．1最大吸收波长的确定分别取100txL的收集液及芦丁标准液，加入2．9mL70％的乙醇，用

5、SP--1910UVPC双光束紫外可见分光光度计于190—400nm下扫描其吸收曲线，比较两扫描曲线，确定荷叶的最大吸收波长为360nm。2．2．2芦丁标准曲线的制备精确称取芦丁标准品5mg，70％乙醇超声波溶解，于50mL容量瓶中定容。分别取0．1mg·mL卅的芦丁溶液0．0，1．0，2．0，3．0，4．0，5．0mL到6个10mL容量瓶中，用70％乙醇定容。取4毫升不同浓度的芦丁溶液，提取的溶剂为空白对照，在波长360nm处分别测其吸光度，绘制芦丁标准曲线。2．2．3黄酮含量的测定取一定量的收集液，按上述同样处理后，与360nm下测定吸光度，根据回归方程计算出收集液中荷叶黄

6、酮的浓度并计算出荷叶收稿日期：2007—03—15基金项目：江西省教育厅重点资助项目(20030058)作者简介：邓胜国(1970一)，男，博士生．·通讯作者：邓泽元(1963一)，男，博士生导师，教授．E—mail：dengzy@ncu．edu万方数据第2期邓胜国等：紫外分光光度法测定荷叶总黄酮含量黄酮的含量。3重现性实验按制备芦丁标准曲线的方法，取4mL浓度为30斗g／mL的标准品溶液4份，在360am波长处，测定吸光度值。4加样回收率试验准确取0．5mL浓度为2．866mg·mL。的收集液4份，依次加入一定量的芦丁标准品，按上述操作方法进行，采用UV法测定吸光度，算出总黄

7、酮的含量，并计算出加样回收率。5结果与分析5．1最大吸收波长的确定2．82．4吨2．01．6O．8200250300350400A／nm2UU250300350400A／nm图2荷叶类黄酮的紫外扫描图由于黄酮类化合物在190～400nm的区域内存在两个主要的紫外吸收带，即峰带I(300—400)nm和峰带II(220～280)am。由图1及图2可知，在波长为258am，360nm处芦丁和荷叶类黄酮的吸收峰吻合很好，但考虑到许多物质(溶剂等许多非黄酮类物质)在258rim左右均有吸收，杂质干扰