光动力疗法联合dc对小鼠heps肝癌移植瘤的抑制作用及免疫效应的研究

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1、徐州医学院硕士学位论文光动力疗法联合DC对小鼠Heps肝癌移植瘤的抑制作用及免疫效应的研究姓名：白爽申请学位级别：硕士专业：肿瘤学指导教师：张南征2012-04徐州医学院硕士学位论文光动力联合DC对小鼠Heps肝癌移植瘤的抑制作用及免疫效应的研究中文摘要目的光动力学疗法(Photodynamict11erapy，PDT)是应用于肿瘤和非肿瘤性疾病的一种局部治疗方法。PDT可直接杀伤肿瘤细胞，同时可诱导宿主产生抗肿瘤免疫应答。PDT与免疫疗法(hIlmllllomer印y’11r)的联合，即光免疫疗法(Photoi删mlnoⅡlerapy，P11r)不但放大、增强了机体的抗肿瘤免疫效应，也降低了

2、其副作用的产生。树突状细胞(DeIl血ticcell，DC)作为一种专职的抗原递呈细胞(灿ltigeIlpreSeIltingceU，APC)，对T细胞的活化具有专一性，可启动机体适应性免疫应答。本实验应用PDT对小鼠Heps肝癌移植瘤进行实验性研究，探讨PDT联合DC的光免疫疗法对小鼠H印s肝癌移植瘤的抗肿瘤及免疫效应，探索一种新的综合疗法，为肿瘤的临床治疗提供实验依据。方法体外培养小鼠骨髓源性DC细胞，4，6．二脒基．2．苯基吲哚(4，6-diamidino-2-1)heIlylindole，DAPI)荧光染色液标记DC后备用。128只6～8周龄雄性健康昆明小鼠皮下接种H印s肝癌细胞，建立

3、小鼠H印s肝癌移植瘤模型，随机分为对照组、单纯PDT组、IT组和PIT组；每组32只。对照组小鼠瘤体内均匀注射同等体积的生理盐水，PDT组小鼠尾静脉注射光敏剂多替泊芬20m啦g体重，24小时后光照肿瘤局部，功率密度为200IIlW／cm2，能量密度为180J／cm2。IT组小鼠行瘤体内均匀注射DAPI标记的DC细胞5×105个／只。PIT组于照光后即刻行瘤体内均匀注射DAPI．DC5×105个／只。(1)观察各组小鼠生存期；(2)测量各组小鼠的肿瘤体积大小，计算抑瘤率；(3)于治疗后12、24及48h分别取IT组和PIT组小鼠腋下近肿瘤侧淋巴结制备组织拓片，荧光显微镜下观察荧光细胞数目；(4)

4、与治疗后12和72h小鼠瘤组织取材，石蜡包埋并切片，苏木素．伊红(h锄atoxylin．esosin，HE)染色后光学显微镜观察；(5)各组小鼠瘤组织切片，分别应'徐州医学院硕士学位论文用Bcl．2抗体、B双抗体行免疫组织化学染色(hm岫ohistoch既lis仃弘mC)；(6)各组分别于治疗后12h、24h、72h、7d、14d分批处死4只小鼠，摘眼球法取小鼠外周血，流式细胞仪测定小鼠外周血T细胞亚群变化；(7)于上述时间点收集各组小鼠外周血并分离血清，酶联免疫吸附试验(EIlzme．1i11l【ediIIlIIlunosorbent弱s嘞ELIsA)检测小鼠血清中细胞因子白介素(Int甜幽

5、，IL)-12水平；(8)治疗后7d取各组小鼠脾脏无菌制备小鼠脾细胞悬液，以小鼠H印s肝癌细胞为靶细胞，乳酸脱氢酶(Lactateddlydmg％ase，LDH)释放法检测小鼠脾细胞细胞毒活性。结果1．体外成功诱导扩增小鼠骨髓来源DC细胞。2．成功建立小鼠Heps肝癌移植瘤模型，成瘤率98％。3．各组小鼠生存时间：PDT组和Prr组小鼠的生存时间与对照组及单纯细胞治疗组相比，明显延长(P<0．01，P．，0．01)。Prr组小鼠生存时间较PDT组明显延长(尸<0．05)，IT组小鼠与对照组生存时间无明显差异。4．各组小鼠肿瘤体积及抑瘤率：Prr组、PDT组治疗后2、8和16d移植瘤的体积较rr

6、组和对照组明显缩小(尸

7、5，差异有统计学意义。6．各组小鼠肿瘤HE染色：对照组肿瘤细胞分布密集，细胞变性坏死及免疫细胞少见，微血管丰富。PDT后12h可见肿瘤细胞退变明显，呈空泡状变性，间质内微血管受损，肿瘤组织周围可见炎细胞浸润。PDT后72h可见肿瘤细胞形态消失，呈凝固性坏死，可见大量炎性细胞浸润。PIT组治疗后较单纯PDT组坏死4徐州医学院硕士学位论文面积大，可见炎细胞浸润。rr组治疗后与对照组未见明显变化。7．各