人脂肪干细胞对急性肺损伤大鼠肺内皮型一氧化氮合酶的影响

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1、人脂肪干细胞对急性肺损伤大鼠肺内皮型一氧化氮合酶的影响计：学位论文：34页表格：O个插图：9幅高鹏指导教师：闻庆平教授申请学位级别：硕士学位论文提交日期：2012年4月学位授予单位：大连医科大学专业名称：麻醉学论文答辩日期：2012年5月学位授予日期：2012年6月评阅人：答辩委员会主席：独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书

2、而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：函鲻暨签字嗍：业年』月寻日目录一、摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(二)英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3二、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·．5(一)前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5(--)材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6(三)

3、结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯14(四)讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18(五)结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21(六)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22三、文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25(一)综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25(二)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3l四、致谢··································-·············

4、···························34人脂肪干细胞对急性肺损伤大鼠肺内皮型一氧化氮合酶的影响硕士生姓名：高鹏指导教师：闻庆平教授专业名称：麻醉学摘要目的：急性肺损伤是由肺外致病危险因子发动或介导的以肺血管通透性增加为主要病理生理学改变的疾病，常作为急诊及各种危重症病情恶化的表征或并发症，其发病机制复杂，进展迅速，死亡率高。虽然经过多年的基础研究和临床探索，目前对于急性肺损伤治疗的问题，未能完全有效解决。近些年来，随着多潜能分化干细胞逐渐被熟知，利用干细胞对多种疾病进行治疗在临床实践中取得重大突

5、破，也为治疗急性肺损伤提供了一种潜在的、具有可操作性的治疗新思路。现有研究已经证实，于细胞对急性肺损伤有良好的治疗效果。但在干细胞治疗急性肺损伤过程中，干细胞对肺血管修复方面的研究尚未有详细的报道。本实验目的是研究人脂肪干细胞对脂多糖作用后的离体大鼠肺微血管内皮细胞的内皮型一氧化氮合酶的影响；以及人脂肪干细胞通过尾静脉移植到急性肺损伤大鼠的体内，对在体肺组织中的内皮型一氧化氮合酶蛋白的影响。方法：本实验采用0．1％I型胶原酶消化人脂肪组织，获取人脂肪干细胞，通过流式细胞仪对人脂肪干细胞表面抗原CD90、CDl06

6、、CD34进行鉴定；通过大鼠外周肺组织块获取大鼠肺微血管内皮细胞，用免疫荧光方法对大鼠肺微血管内皮细胞表面Flt．1、vWF抗原进行鉴定。离体实验，脂多糖599／ml作用于大鼠肺微血管内皮细胞4小时后，对照组采取更换正常培养基培养72小时；实验组采取更换正常培养基，并通过0．41ma的TranswelI与入脂肪干细胞进行共培养72小时，免疫荧光检测大鼠肺微血管内皮细胞内皮型一氧化氮合酶的表达变化。在体实验，除空白组腹腔注射生理盐水外，其他组均采用腹腔注射脂多糖(6mg／kg)复制大鼠急性肺损伤模型。半小时后，空白

7、组、急性肺损伤组，尾静脉注射生理盐水：治疗组，尾静脉移植5×l05个人脂肪干细胞到大鼠急性肺损伤的体内。7天后，检测大鼠肺湿／干重比，WesternBlot检测肺组织中的内皮型一氧化氮合酶蛋白的表达变化。结果：1．人脂肪干细胞表面抗原CD90高度表达，90．6％；CDl06少量表达，7．5％；CD34几乎不表达，1．8％。2．大鼠肺微血管内皮细胞表面Fit．1、vWF抗原鉴定检测呈阳性。3．离体实验：72小时后，对照组与实验组进行比较，实验组的大鼠肺微血管内皮细胞内皮型一氧化氮合酶表达明显增加。4．在体实验：7天

8、后，治疗组肺湿／干重比与急性肺损伤组比较显著降低(P<0．05)。治疗组肺组织中的内皮型一氧化氮合酶蛋白表达与急性肺损伤组比较显著增加(P<礁∞)。’结论：人脂肪干细胞可以促进脂多糖作用后的大鼠肺微血管内皮细胞的内皮型一氧化氮合酶表达增加。入脂肪干细胞可以显著降低急性肺损伤大鼠肺湿／干重比：人脂肪干细胞可以促进急性肺损伤大鼠肺组织的内皮型一氧化氮合酶表达显著增加。关键词：