一株鸡源性肠炎沙门氏菌mlst分型及三型分泌系统基因分析

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1、山东农业大学硕士学位论文一株鸡源性肠炎沙门氏菌MLST分型及三型分泌系统基因分析姓名：王涛申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：常维山20120615山东农业大学硕士学位论文．中文摘要肠炎沙门氏菌是一种致病菌，该菌主要引起畜禽的胃肠炎以及人类肠炎和食物中毒。近年来，肠炎沙门氏菌已成为引起胃肠炎和食物中毒的主要病原菌之一，随着由肠炎沙门氏菌引起的病例不断上升，该菌不仅严重阻碍了养禽业的发展，而且还威胁着人畜健康，已经成为公共卫生所关注的问题。因此，深入了解该菌有利于更好地对该菌所引起的感染进行

2、防治。肠炎沙门氏菌的侵入动物机体以及致病性与三型分泌系统密切相关，研究肠炎沙门氏菌的三型分泌系统有利于深入分析肠炎沙门氏菌的致病性。本次试验对临床分离的一株疑似肠炎沙门氏菌的临床分离菌进行鉴定，通过鉴定以确定其是否为一株肠炎沙门氏菌并确定其血清型。运用多位点序列分型技术对该株肠炎沙门氏菌进行分型，了解该株肠炎沙门氏菌的基因序列型。通过药物敏感性试验分析肠炎沙门氏菌的耐药性，从分子生物学角度分析其耐药机理。分析肠炎沙门氏菌的三型分泌系统基因来了解其基因特点，并分析不同细菌三型分泌系统的基因序列差异。

3、本次试验运用培养特性、生化试验、血清学试验、分子生物学试验对于该株细菌进行鉴定，应用多位点序列分型(MLST)对该株细菌进行分型。MLST试验方法规定的7个管家基因分别为thrA、dIlaN、hemD、hisD、pure、sucA、aroC，根据PubMLST(http：／／pubmlst．org)试验要求设计了7个管家基因的引物，分别扩增测序。运用K—B纸片法检测该株细菌的耐药性，根据耐药性试验结果设计13对引物扩增细菌基因组内耐药基因。血清学方法调查该株细菌在山东省蛋鸡群中流行情况。测序分析三

4、型分泌系统的基因序列，从分子生物学角度进行分析。该株临床分离细菌培养特性方面符合沙门氏菌的培养特性，生化试验结果显示该株沙门氏菌根据《伯杰氏手册》关于肠炎沙门氏菌生化反应特征的标准，该株细菌符合肠炎沙门氏菌的生化特征。16srRNA基因测序结果显示该株细菌与鸡肠炎沙门氏菌P125109同源性达100％。动物回归性试验结果显示该株细菌致病性与肠炎沙门氏菌相同并且分离鉴定结果与肠炎沙门氏菌相符。血清学试验结果确定其血清型为03，19(+k09(+)；Hg，p(+)；Hg(+)；Hm(+)，多位点序列分

5、型结果显示该株细菌基因型为STl1。用自制的凝集抗原对采集自山东省泰安市、莱芜市、济宁市、滨州市、日照市、潍坊市、临沂市的690份血样进行的检测，检测结果显示阳性率2．2％，阴性率97．8％。药敏结果显示肠炎沙门氏菌耐受多种药物。肠炎沙门氏菌耐药基因扩增中扩增出ant(6)．iv基因、OXA．10基因、OXA．1基因、CTX—M．9基因、TEM基因与预期目的片段大小一致。三一株鸡源性肠炎沙门氏菌MLST分型及三型分泌系统基因分析型分泌系统试验结果显示该株肠炎沙门氏菌的sipa基因、sipd基因没有

6、出现变异，但是三型分泌系统的sipa基因与sipd基因在比对过程中发现沙门氏菌亲缘关系相近的这两个基因同源性高。通过试验结果显示该株细菌为肠炎沙门氏菌血清型为03，19(+)；09(+)；Hg，p(+)；Hg(+)；Hm(+)，基因型为STl1，该株细菌在全世界范围内皆有流行。该株型号为STl1的肠炎沙门氏菌在山东省蛋鸡群中有感染情况但是其感染率较低。该株细菌耐受多种抗生素，在其基因组内存在ant(6)一iv基因、OXA。10基因、OXA．1基因、CTX—M一9基因、TEM基因。该株细菌三型分泌系

7、统中sipa基因、sipd基因未发现变异情况。关键字t肠炎沙门氏菌；多位点序列分型：流行病学调查；三型分泌系统lI．坐查奎些奎堂堕主兰垡笙壅一———————————————————————————一MuItilocusSequenceTypingofaSalmonellaEnteritidisIsolatedf}omChickenandAnalysisofItsTypeThreeSecretiongSystemGenesAbstractSalm卯P肋口，?招删如isapathogen，it'sma

8、inlycausedbythelivestockofgastroententlsaSwellaSt0huI】【lanenteritisandfoodpoisoning．Salmonellaenteritidishasbecomeoneofthemainpathogenmatcausesgastroenteritisandfoodpoisoningforthepastfewyears·WiththerisingcasescausedbySalmonellaenteritidis，th