pparγ激活改善高糖诱导血管内皮细胞胰岛素抵抗及机制

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1、南昌大学硕士学位论文PPARγ激活改善高糖诱导血管内皮细胞胰岛素抵抗及机制姓名：占日新申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：黄起壬201206摘要目的：建立高糖(HG)诱导血管内皮细胞胰岛素抵抗(IR)模型；观察PPAR丫激活对高糖诱导血管内皮IR的影响并探讨其作用机制。方法：将人脐静脉内皮细胞(HuvECs)均匀接种在细胞培养皿上，随机分为4个组：(1)『F常组(Contr01)：DMEM(含Glucose5．5mmol／L)完全培养液，(2)胰岛素抵抗组(IR)：DMEM(含Glucose33mmol／L)完全培养液

2、，(3)Pioglitazone(PG)处理组(IIHPG)：DMEM(含PG25¨mol／L+Glucose33mm01／L)完全培养液，(4)Rosiglitazone(RG)处理组(IIHRG)：DMEM(含RG5“mol／L+Glucose33mmol／L)完全培养液。HUVECs先在含33mmol／LGlucose的DMEM完全培养液培养48h，然后分别在含25umol／LPG+33Imol／LGlucose的DMEM完全培养液(IR+PG)或含5umol／LRG+33mmol／LGlucose的DMEM完全培养

3、液(IR+RG)继续培养24h，IR组细胞则在含DMSO+33mmol／LGlucose的DMEM完全培养液继续培养24h，Con仃ol组细胞则在含5．5mmol／LGlucose的DMEM完全培养液培养72h。上述处理结束后，各组细胞换成无血清的DMEM(含5．5mmol／LGlucose)继续培养4h，最后用胰岛素(终浓度为5mIU／L)刺激10min，收集细胞上清液和细胞，分别进行以下指标检测：①细胞上清液中NO和AngII水平；②HUVECs中eNOS蛋白的表达水平；③HuvEcs中PPAR丫蛋白的表达水平；④HU

4、VECs中IKK“B蛋白的表达水平；⑤HuvECs中IKB0【蛋白的表达水平；⑥HuVEcs中p．IKK“p(Serl76／181)表达水平；⑦细胞上清液中TNF．0【，IL．6，sICAM．1和sVACM．1水平。结果：①细胞上清液中No和AngII水平：HG显著诱导HuVEcs胰岛素抵抗，表现为NO水平降低和AngII水平升高，与Control组相比具有显著性差异(尸

5、著性差异(尸>o．05)。②HuVECs中eNoS蛋白的表达水平：IR组eNOS蛋白表达的明显下调，与Control组相比具有显著性差异(尸<0．05)；IR+PG组和IR+RG组eNOS蛋白表达明显上调，与IR组相比具有显著性差异(尸O．05)。③HuVEcs中PPARY蛋白的表达水平：IR组PPAR丫蛋白表达明显上调，与Contr01组相比具有显著性差异(P<0．01)：IR+PG组和IR+RG组PPA脚蛋白表达也上调，与Control组相比具有显著性差

6、异(尸<0．01)，但与IR组比较无显著性差异(尸>O．05)。④HUvECs中IKK“p蛋白的表达水平：IR组IKK0【／D蛋白表达的明显上调，与Control组相比具有显著性差异(PO．05)，而PG和RG处理24h后，与I

7、R组相比，IKB0【表达水平也无明显改变(P>0．05)；PG和RG处理48h后IKBc【蛋白表达明显上调，与IR组相比具有显著性差异(尸O．05)。⑥HuⅦcs中p．IKK彬B(Serl76／181)表达水平：IR组中p—IKK0【／B(Serl76／181)蛋白表达量明显上升，与Control组相比具有显著性差异(尸O．05)。⑦细胞上清液

8、中TNF．伍、IL．6、sICAM．1和sVACM．1水平：IR组中TNF．0【、IL．6、sICAM．1和sVACM．1水平显著升高，与Control组相比具有显著性差异(尸<0．05)；而PG和RG处理24h后，TNF．0【、IL．6、sICAM．1和sVACM．1水平均显著降低，与IR组相比具有显