针刺手厥阴经穴对缺血再灌注损伤中akt心肌保护作用的研究

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1、中图分类号论文编号学科分类号密级ShanxiUniversityofChineseMedicine硕士学位论文针刺手厥阴经穴对缺血再灌注损伤中Akt心肌保护作用的研究ResearchofElectroacupuntureofAcupointsofthePericardiumMeridianonMyocardialProtectiveEffectofAktinIschemia-ReperfusionInjury研究生姓名：高海宁导师姓名、职称：黄安副教授田岳凤教授学科、专业名称：针灸推拿学研究方向：针刺效应的基础与临床应用研究申请

2、学位类型：科学学位二O一二年三月二十九日山西中医学院学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名：年月日关于学位论文使用授权的声明本人完全了解山西中医学院有关保留使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本

3、人授权山西中医学院可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名：论文导师签名：年月日中文摘要目前心血管疾病是当今人类导致死亡的主要原因之一，心肌缺血-再灌注损伤（I/R）是临床中常见的组织器官损伤，但其机制尚不十分明晰。研究表明多种生长因子对心肌细胞均有保护作用，使其免受局部缺血及其他损伤带来的损害。虽然这些心肌保护因子的下游转导通路很复杂，但在很多情况下，Akt的激活是一个共同特征。Akt是细胞内重要的信号转导通路，在

4、细胞的凋亡、存活、增值以及细胞骨架的变化等活动中发挥重要的生物学功能，特别是对细胞凋亡、存活的调节作用。本项研究在已有的工作基础上，进一步观察了针刺手厥阴经穴对大鼠缺血再灌注损伤心肌细胞内p-Akt蛋白含量的变化及离体心肌细胞培养抗凋亡作用的影响，并对其作用机制进行探讨，为今后临床研究提供理论依据。目的：本研究以缺血再灌注损伤大鼠模型心电图为基础，观察电针手厥阴经“内关”、“郄门”穴在缺血-再灌注损伤中对大鼠血浆Hcy、体内Akt磷酸化水平及在体、离体心肌细胞凋亡的影响，阐明Akt信号转导通路在抑制凋亡，保护心肌细胞方面的作用机

5、理。方法：在体实验研究：Wistar大鼠70只，随机分为假手术组、缺血-再灌注模型Ⅰ组、缺血-再灌注模型Ⅱ组、针刺“内关”治疗组、针刺“郄门”治疗组、针刺“合谷”对照组和LY294002抑制剂组。假手术组只穿线不结扎冠状动脉，其余各组制备缺血-再灌注模型，抑制剂组在造模前尾静脉注射LY294002抑制剂（0.3mg/kg），3个针刺穴位组分别电针大鼠“内关”穴、“郄门”穴或“合谷”穴分别各20min，结扎冠状动脉左前降支40min，心电图监测，而后再次电针上述穴位20min，松扎，恢复冠脉灌流，抑制剂组实验过程同针刺“内关”治疗

6、组。假手术组于穿线后100min、其他各组于再灌注后60min，腹腔静脉取血并摘取心脏，观察血浆Hcy含量、p-Akt的含量（免疫印迹法）、心肌细胞凋亡率（TUNEL法）。数据用SAS8.2统计软件由专业人员进行分析。离体实验研究：Wistar大鼠14只，随机分为假手术组、缺血-再灌注模型Ⅰ组、缺血-再灌注模型Ⅱ组、针刺“内关”治疗组、针刺“郄门”治疗组、针刺“合谷”治疗组和LY294002抑制剂组，各组第一部分实验同在体实验。摘取心脏后，进行第二部分实验，离体培养3h，流式细胞仪AnnexinV/PI双染检测心肌细胞凋亡率。结

7、果：1.缺血-再灌注模型Ⅰ、Ⅱ组心电图ST段均抬高明显，与针刺“内关”治疗组、针刺“郄门”治疗组及LY294002抑制剂组比较，差异有统计学意义（P<0.01）；I“合谷”组ST段变化趋势与模型组近似，无显著性差异（P＞0.05）。2.与假手术组比较，模型Ⅰ、Ⅱ组、“合谷”组及抑制剂组大鼠血浆Hcy含量明显提高（P<0.01）；与模型Ⅰ组比较，模型Ⅱ组血浆Hcy含量无明显差异（P＞0.05），“内关”组、“郄门”组和抑制剂组血浆Hcy含量明显降低，差异有统计学意义（P<0.01）。与“内关”组比较，“郄门”组血浆Hcy含量无明显

8、差异（P＞0.05），模型Ⅰ组、模型Ⅱ组、“合谷”组及LY294002抑制剂组血浆Hcy含量明显高于针刺“内关”组，差异有统计学意义（P<0.01）。3.与假手术组比较，两模型组、“合谷”组及抑制剂组大鼠心肌组织p-Akt含量明显降低（P<0.01）；“内关”组