异甘草素对小鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用研究

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1、分类号：R965学号：201500370012硕士学位论文异甘草素对小鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用研究ProtectiveEffectofIsoliquiritigeninonMyocardialIschemiaReperfusionInjuryinMice研究生姓名：刘敬指导教师：王振华副教授学科门类：理学专业名称：生物学论文提交日期：2018年4月1日摘要根据世界医疗卫生组织数据统计显示，缺血性心脏病占非传染性疾病之首，这种现状在不断恶化，作为致死率和致残率最高的非传染性疾病，心血管及其并发症已经在严重危害国人健康的同时消耗巨大的社会医疗资源。心血管病是致全球人口死亡的头号杀手，其

2、发病率仍呈逐年上升趋势，其中血管结构功能障碍致缺血性心肌病为主要风险因素。采用介入治疗手段恢复冠脉血液供应挽救濒死心肌是临床主要治疗手段，但冠脉再通后的再灌注损伤往往导致更为严重心肌损伤，可引起心律跳动不正常，甚至会导致致命性危害，还继而诱发心肌超微结构产生改变，导致心衰的发生。心肌缺血再灌注损伤是由很多机制途径联合作用导致的，反应比较复杂，具体机制还不完全明确。当维持心肌组织正常生理机能的血液灌流减少时，相应的就会导致心肌中的灌流血液供应不足、营养物质供应相对减少及组织内清除代谢产物的能力减少，从而会导致不同程度的心肌缺血[1-3]。多数情况下，如果缺血的心肌组织能够得到及时的供血，

3、心肌组织会得以很快的修复，心脏也会恢复正常收缩舒张功能，甚至会恢复健康状态。但是，有时缺血后恢复供血不仅未能恢复心脏功能，反而致更为明显的心脏结构损伤和功能障碍，这种导致心肌结构发生不可逆伤害或者加重病情的现象被称为心肌缺血再灌注（ischemia/reperfusion，I/R）损伤。I/R损伤涉及许多临床干预措施，在临床中会采取很多恢复血液灌流的治疗手术，但是这些均可发生心肌I/R损伤[4-6]。因此，防治心肌I/R损伤是现在的研究热点问题。本实验采用了改良的Langendorff离体心脏逆向灌流系统，建立心肌I/R伤模型。经过前期预实验最终确定缺血时间为30min，复灌时间45m

4、in的实验方案，对小鼠左心室进行连续监测记录再灌注过程中的左心室发展压（LVDP）、左心室作功（RPP=LVDP×HR）、左心室最大收缩速率（+dP/dt）、左心室最大舒张速率（-dP/dt）、左心室发展末压（LVEDP）等心功能指标。实验开始稳定15min后加药预处理，以1µL/mL参附注射液预处理15min。实验数据统计分析得参附注射液明显改善了心脏血流动力学指标（与对照组相比，P＜0.01），表明模型建立是成功的，可以进行后续相关药物的筛选实验。基于模型建立成功的基础上，考察了异甘草素对小鼠离体心脏I/R损伤的保护作I用。首先通过血流动力学指标实验考察了异甘草素对小鼠离体心脏缺血

5、I/R损伤的保护作用。实验结果显示，异甘草素预处理组缺血再灌注后心脏血流动力学恢复情况明显优于对照组（P＜0.01）。为进一步确定其药理作用，检测离体灌流后小鼠心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)的活性以及丙二醛(MDA)的生成量；为了进一步探究其深层次机制问题，实验设计检测了离体心肌缺血再灌注后心肌组织中AMPK活性的变化。实验表明异甘草素可以改善小鼠离体心肌I/R损伤后小鼠的心肌舒缩功能，确保遭受损伤的小鼠心肌短时间内恢复心脏功能，对其心肌缺血再灌注损伤具有一定的抑制作用，研究成果为进一步探究异甘草素心脏保护作用机制及相关产品开发奠定了前期基础，同时为甘草的临床应用提供了理论支持。本实

6、验部分研究了分离心肌组织线粒体，JC-1荧光探针染色流式检测线粒体膜电势；采用化学发光法测定心肌组织中ATP含量。实验结果表明：与模型组比较，ISL处理可明显逆转I/R所致心肌线粒体膜电势以及心肌组织ATP含量下降。大量研究证明I/R破坏线粒体结构和功能的完整性，影响其稳态平衡，从而导致I/R损伤，因此研究在缺血再灌注损伤中线粒体参与的机制，对减轻I/R损伤具有重要意义。关键词：异甘草素；心肌缺血再灌注损伤；AMPK；线粒体；保护作用IIAbstractAccordingtostatisticsfromtheWorldHealthOrganization,ischaemicheartd

7、iseaseisthenumberonecauseofnon-communicablediseases.Thisstatusisdeteriorating.Asthenon-communicablediseasewiththehighestmortalityanddisabilityrates,cardiovascularandcomplicationsItwillconsumehugesocialandmedicalresourceswhil