重组腺相关病毒载体神经肽y对海人酸致痫大鼠中gaba及nmda受体表达变化的影响

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1、河北医科大学硕士学位论文重组腺相关病毒载体神经肽Y对海人酸致痫大鼠中GABA及NMDA受体表达变化的影响姓名：王坤申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：李文玲201203中文摘要重组腺相关病毒载体神经肽Y对海人酸致痫大鼠中GABA及NMDA受体表达变化的影响’一摘要目的：癫痫是慢性反复发作性短暂脑功能失调综合征，以脑神经元异常放电引起的痫性发作为特征。癫痫的发生和脑内兴奋性、抑制性神经递质失衡有关。丫．氨基丁酸(GABA)和谷氨酸(Glu)均属于氨基酸类递质，分别为神经系统的抑制性和兴奋性神经递质。GABA及其受体在癫痫中的

2、作用已广泛研究，目前越来越侧重于GABA受体与癫痫之间的相互关系的研究。与癫痫关系密切的GABA受体主要是GABAA受体(GABA．AR)和GABAB受体(GABA．BR)。谷氨酸(Glu)在体内存在相应的受体，按能独立激活受体物质的不同将Glu．R分为：N-甲基．D．天门冬氨酸受体(N．methyl．D—aspartate，NMDAR)、红藻酸(Kainate，KA)受体、使君子氨酸(Quisqualate，QA)受体、氨基．3．羟基．5．甲基．4异恶唑丙酸(AMPA)受体及L．2．氨基．4磷酰丁酸(L．AP4)受体，后四种

3、合称为非NMDAR受体。神经肽Y(NPY)是由36个氨基酸组成的一种肽类物质，其广泛分布于中枢神经系统及周围神经系统，在中枢神经系统中以海马内浓度最高。NPY作为一种神经递质，其与去甲肾上腺素、肾上腺素、丫．氨基丁酸(GABA)、生长抑素等经典的神经递质共存lI】。大量研究证实NPY与癫痫之间的确存在着密切的关系，NPY在抗癫痫的过程中发挥着重要的作用。本实验通过观察探讨重组腺相关病毒载体神经肽Y(rAAV2／l加Y．EGF．P)干预前后海人酸致痫大鼠海马中GABA．BR，NMDAR的亚基NRl和NR2A及NPY表达的变化情况

4、来探讨癫痫的发病机理。方法：将36只雄性Wistar大鼠建立随机分为两组：对照组(NS组)和实验组。实验组建立慢性癫痫模型：造模成功后分两组：海人酸致痫大鼠组(KA组)以及神经肽Y(NPY)干预组(NPY组)。KA组大鼠海马CA3区注射KA，‘造模成功后不注射病毒；NPY组大鼠在慢性模型成功后，向脑室注射10“l的rAAV2／1．NPY-EGFP进行基因转染手术，滴度为5×10¨v．g．／ml。对照组海马CA3区注射等量的生理盐水。各组动物分别于基因转染后2w、4W，观察其发作行为学变化，深部麻醉后快速断头，中文摘要冰上取海马

5、，置于Eppendorf管中，液氮中保存备。每组动物选取12只，每个时间点6只大鼠，用RT-PCR检测GABA．BR的表达，扩增完毕后，以GAPDH为内参照基因，与对照组相比，得到目的基因表达的相对定量值(RQ值)，我们将RQ值用于统计分析，定量分析其表达情况。RT-PCR的结果采用ANOVA单因素方差分析，GABA．BR各组之间的相关性用Spearman等级相关分析，按照P<0．05作为检验水准。用免疫组化方法检测各组NRl，NR2A，GABA．BR和NPY的表达情况。用双盲法统计试验结果，采用半定量积分法，对每个点的阳性细

6、胞率及阳性细胞着色强度分别进行分级记分，然后根据两项之和确定其阳性强度。结果：1NPY组大鼠在干预后发作明显减少，KA组发作无明显变化。2通过RT-PCR发现，对照组(NS组)、KA组及NPY组海马组织均有GABA．BR表达。KA组GABA．BR的基因表达较对照组下降(p

7、R2A、NPY表达明显增高，GABA．BR表达降低；NPY组其NRl、NR2A表达明显下降，NPY表达持续升高，GABA．BR表达有上升趋势。结论：1KA组中GABA．BR的表达明显下降，NPY组其表达有回升趋势。这说明GABA．BR基因表达的降低可能是导致癫痫发生、发展的重要因素。NPY可能通过改变抑制性神经递质的GABA．BR的表达来达到调控癫痫发作的目的。2NMDA受体低表达可能参与了NPY抑制癫痫发作的发病机制。关键词：癫痫；重组腺相关病毒；神经肽Y；海人酸；丫．氨基丁酸受体；GABA-B；N．甲基．D．天冬氨酸受体英

8、文摘要Theinfluenceofreaturcturingadeno—·associatedviruscarrierpeptideYonth,’chang,ofGABAneuropeptJdeY0ntheexDresslonchangesofGABAreceptorsand