梓葛冻干粉针的研制及其初步安全性评价

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1、西南大学硕士学位论文梓葛冻干粉针的研制及其初步安全性评价姓名：原欢欢申请学位级别：硕士专业：药物分析学指导教师：徐晓玉20120602摘要梓葛冻干粉针的研制及其初步安全性评价药物分析学专业研究生原欢欢指导教师徐晓玉教授要梓葛冻干粉针为本实验室自主研发的用于防治缺血性脑血管疾病的一种新型中药单体复方制剂，具有独创性，可获得自主知识产权。本课题受到教育部项目(XDJK2009C084、)a)nQ010C059)科研基金的支持。目的：按照国家食品药品监督管理局《药品注册管理办法》相关要求，研制梓葛冻干粉针，确定其的处方、制备工艺，制定其质量标准，并考察其稳定性及初步安全性。方法；1．梓葛

2、冻干粉针的处方筛选：选用磺丁基．p环糊精作为葛根素的增溶剂，制作磺丁基．p环糊精对葛根素的增溶曲线，应用梯度浓度法确定磺丁基．B．环糊精和葛根素的投料比；采用分组评分法考察含不同质量浓度的葡萄糖、乳糖、甘露醇和空白的梓葛冻干粉针的外观性状和水分含量，从而选择合适的填充剂，确定梓葛冻干粉针的处方。2．梓葛冻干粉针的制备工艺研究：采用时间评分法考察不同的投料顺序和加热条件对葛根素溶解速度的影响，确定梓葛冻干粉针的制备过程：采用分组评分法考察不同预冻温度与时间、升华干燥温度与时间和解析干燥温度与时间对梓葛冻干粉针的影响，确定梓葛冻干粉针的冻干工艺。3．梓葛冻干粉针质量标准研究：采用反向高

3、效液相色谱法(RP-HPLC)，建立药物含量及有关物质的测定方法：考察梓葛冻干粉针产品含量、有关物质、水分、pH值等变化，对其进行质量控制，建立其质量标准。4．梓葛冻干粉针的稳定性考察：对放大实验生产的三批梓葛冻干粉针进行影响因素实验、加速实验和长期实验，考察其稳定性。5．梓葛冻干粉针的初步安全性考察：安全性考察分为过敏性实验、溶血性实验、刺激性实验、急性毒性实验和一般药理学实验。(1)过敏性实验：观察攻击给药后豚鼠是否出现过敏反应并判定过敏反应程度为全身主动过敏实验；观察攻击给药后SD大鼠皮肤是否出现蓝斑并记录蓝斑直径为皮肤被动过敏实验。(2)溶血性实验：观察拟用临床浓度梓葛冻干

4、粉针是否导致2％兔红细胞悬液出现溶血和凝聚反应。(3)刺激性实验：观察用药侧兔耳血管和肌肉组nl两南大学硕十学位论文织的病理切片是否出现病变和坏死，并与对照侧比较。(4)急性毒性实验：观察和记录不同浓度梓葛冻干粉针给药后KM小鼠的反应和死亡情况。(5)比较梓葛冻干粉针给药后对动物的神经系统、呼吸系统和心血管系统的影响，并与生理盐水对照组比较。结果：1．梓葛冻干粉针的处方t磺丁基．p环糊精是葛根素的良好增溶剂，增溶曲线线性关系良好(r---0．99971；磺丁基．阻环糊精和葛根素的投料质量比确定；梓葛冻干粉针最佳处方为葛根素Xmg、梓醇Ymg和磺丁基一p环糊精Zmg，制成2mL冻干原

5、液。2．梓葛冻干粉针的制备工艺：(1)冻干原液的制备；按最佳处方称取各组分，确定投料顺序，加热加速葛根素溶解：(2)产品的冻干工艺：①预冻：确定预冻温度和时间；②升华干燥：确定真空度和时间，自然升温至室温；⑨解析干燥：确定真空度，升温，保温时间。3．梓葛冻干粉针质量标准：(1)含量及有关物质：采用RP．HPI．,C法，流动相为水．乙腈，梯度洗脱，检测波长为210am，葛根素和梓醇均在5"--200mg／L浓度范围内呈现良好的线性关系(r--0．9999)；相对含量控制范围为90％～110％；有关物质控制Q％；(2)水分控制在<3％；(3)pH值控制在4．5～6．5。4．梓葛冻干粉针

6、的稳定性：梓葛冻干粉针的稳定性实验结果显示，影响因素实验的高温条件(60℃)对梓葛冻干粉针的影响强于高湿度(90％)和强光条件(4500Lx)，加速实验6个月和长期实验9个月的结果均显示梓葛冻干粉针的含量、有关物质、水分、pH值等相对稳定。5．梓葛冻干粉针的初步安全性：(1)过敏性实验：梓葛冻干粉针28．4mg／kg和85．3me,／kg剂量组豚鼠均未出现全身主动过敏反应：梓葛冻干粉针32．7mg／kg和98．1mg／kg剂量组SD大鼠均未出现明显皮肤过敏反应。(2)溶血性实验：1mg／rnL拟用临床浓度的梓葛冻干粉针管均未出现溶血和红细胞凝聚现象。(3)刺激性实验：17．0mg／

7、kg和51．0mg／kg梓葛冻干粉针用药侧兔耳血管和肌肉组织均未见明显病变、坏死现象。(4)急性毒性实验：梓葛冻干粉针对K／vl小鼠的LD50为1562．4mg／kg。(5)一般药理学实验：梓葛冻干粉针52．3mg／kg、104．6mg／kg、209．2mg／kg剂量对KM小鼠的中枢神经系统未见明显影响(P>O．05)：梓葛冻干粉针32．7mg／kg、65．4mg／kg、130．8mg／kg剂量对SD大鼠的心血管系统和呼吸系统未见明显影响(P>0．05)。结论：1．本