中空纤维离心超滤法在药代动力学研究中的应用

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1、河北医科大学硕士学位论文中空纤维离心超滤法在药代动力学研究中的应用姓名：侯自立申请学位级别：硕士专业：药物分析学指导教师：蒋晔201203中文摘要中空纤维离心超滤法在药代动力学研究中的应用摘要药物进入人体血液循环后会与其中的血浆蛋白发生不同程度的可逆性结合，而其中只有游离部分药物才能穿过细胞膜而接触相应的受体，与药理作用强度密切相关。药物与血浆蛋白的结合在一定条件下可保持恒定，当游离型药物随着转运和消除而减少时，部分结合型药物就会随即释放成游离药物，使血浆和作用部位仍维持一定的药物浓度；药物与血浆蛋白的结合也具有饱和

2、性，这是因为血浆蛋白的结合能力是有限的，而当药物浓度超过血浆蛋白的结合能力时，药物与血浆蛋白的结合出现饱和，导致游离部分药物突然增多；此外，临床上合并用药的情况较为常见，此时由于血浆中药物与药物间的相互作用，也会导致药物蛋白结合程度的改变，这主要是由于合用药物竞争药物．蛋白结合位点所致，并且合用药物的种类越多，这种竞争作用将会越明显。血浆蛋白结合率是指血浆中的蛋白结合部分药物所占总药物量的百分率，用于表征药物与血浆蛋白的结合程度。血浆蛋白结合率影响药物在体内的分布、代谢与排泄，从而影响其作用强度和作用时间，是药代动力

3、学研究中的重要参数之一。因此，药物血浆蛋白结合率研究对于新药研究开发和临床上指导合理用药都是具有重要意义的。目前测定药物血浆蛋白结合率多用平衡透析法和超滤法，其中平衡透析法操作繁琐费时，一般需要控温37℃且透析12h以上，且大量透析液的加入稀释了血浆样品，可能会破坏原有的药物．蛋白结合平衡，使测定结果失真；而超滤法也是目前常用的蛋白结合率测定方法，该方法操作较平衡透析法简便省时，然而离心完成后所得超滤液体积占待测血浆体积的比例较大，使待测血浆的胶体渗透压和蛋白浓度的升高，因此所得蛋白结合率结果可能是在偏离血浆真实生理

4、环境的前提下获得的，且商品化的超滤管价格昂贵，分析成本较高。本课题采用一种微型的中空纤维离心超滤装置(HFCF．uF)用于测定药物的血浆蛋白结合率。该方法是以中空纤维超滤膜为分离介质，在离心力的作用下使游离药物自由通过中空纤维超滤膜，而药物．蛋白复合物因中文摘要分子量较大而被截留；重要的是在离心完成后，所得超滤液的体积占待测血浆比例较小，这对于血浆中的药物．蛋白结合平衡几乎不会造成影响，因此可在血浆保持原有生理环境的前提下测定药物的蛋白结合率；此外，简易的实验装置也大大降低了分析成本，更易普及应用。所建方法为药物的血

5、浆蛋白结合率测定，尤其是在合并用药的情况下药物蛋白结合率的测定提供一种实用、可靠的分析手段。新型的碳青霉烯类抗生素比阿培南，属于时间．依赖性抗生素，该药物PK／PD的一个评价参数是AUC>MIC(即MIC以上的AUC部分)。本文借助于HFCF—UF装置对血浆样品进行前处理，结合HPLC测定其血药浓度并进行药代动力学研究。样品前处理操作简单快速，且较传统的沉淀蛋白法大大提高了检测灵敏度。所建方法较适用于碳青霉烯类抗生素比阿培南的血药浓度测定以及药代动力学研究。第一部分：中空纤维离心超滤法测定药物的血浆蛋白结合率(一)中

6、空纤维离心超滤法测定绿原酸的血浆蛋白结合率目的：利用微型的中空纤维离心超滤装置结合HPLC．UV法测定绿原酸的血浆蛋白结合率。方法：取0．5mL血浆样品置中空纤维离心超滤装置中，在1．78x103g下离心10min，抽取中空纤维内超滤液10此直接进行HPLC—UV分析，得到绿原酸的游离浓度；并结合传统的沉淀蛋白法测定血浆中绿原酸的总浓度。结果：所得超滤液中无大分子物质，可直接进样测定；游离绿原酸在0．126～4．04gg·mL。范围内线性关系良好(r=O．9991)，方法的绝对回收率为96．4％，RSD<2．O％。在

7、低、中、高(0．505gg·mL～，2．02gg‘mL一，4．04gg·mL。)三种浓度下，绿原酸的蛋白结合率分别为38．7％，34．7％，35．6％．结论：所建方法简便快速，重现性好，适用于药物血浆蛋白结合率的测定。绿原酸与人血浆蛋白有中等程度结合，且不存在浓度依赖性。关键词：绿原酸；蛋白结合率：中空纤维；超滤法；HPLC(二)中空纤维离心超滤法研究庆大霉素对万古霉素血浆蛋白结合率的中文摘要影响目的：利用中空纤维离心超滤法研究在体外条件下庆大霉素是否会影响万古霉素的蛋白结合率。方法：采用中空纤维离心超滤法分离．HP

8、LC法测定血浆中游离的万古霉素，并结合传统的沉淀蛋白法测定其总药物浓度。考察在体外条件下，庆大霉素的加入前后万古霉素的蛋白结合率，并用配对f检验分析万古霉素的蛋白结合率是否存在显著性差异。分析方法采用ZORBAXSB．C18(1sominx4．6mm，5岬)，流动相为甲醇．50mmol·L’1磷酸氢二钾(加O．3％三乙胺，用磷酸调pH3．2)=