血管紧张素ⅱ及氧化低密度脂蛋白对大鼠血管平滑肌细胞中smad4表达的影响

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1、三峡大学硕士学位论文分类号R392密级公开UDC硕士学位论文血管紧张素Ⅱ及氧化低密度脂蛋白对大鼠血管平滑肌细胞中Smad4表达的影响学位申请人：褚昀赟学科专业：免疫学指导教师：刘先哲教授二○一二年五月1三峡大学硕士学位论文ADissertationSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineStudyontheEffectsofAngiotensinⅡAndOxidizedLow-densityLipoproteinonSmad4ExpressioninCulturedRat

2、VascularSmoothMuscleCellsGraduateStudent:ChuYunYunMajor:immunologySupervisor:Prof.LiuXianZheChinaThreeGorgesUniversityYichang,443002,P.R.ChinaMay,20122三峡大学硕士学位论文三峡大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明确方式标明，本人完全意

3、识到本声明的法律后果由本人承担。学位论文作者签名：日期：三峡大学研究生知识产权承诺书本人承认：我作为三峡大学硕士研究生在校学习期间，在导师指导下，依据研究工作所作学位论文的知识产权全部权归三峡大学所有。本人承诺：我有义务维护三峡大学的知识产权，凡是以我本人学位论文内的全部或部分研究成果，或实验数据为基础所形成的研究论文及成果，无论是以何种形式刊发学术论文、进行成果鉴定或申报奖励，均以三峡大学为第一作者单位或完成单位，并事先征得导师或学校相关部门的同意。我愿承担因违背上述承诺而引起的一切法津和经济后果。学位论文作者签名：日期：I三峡大学硕士学位论文内容摘要目的：通过研究不同浓度的血管

4、紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngII）及氧化低密度脂蛋白（oxidizedlow-densitylipoprotein，ox-LDL）对体外培养的大鼠血管平滑肌细胞中（vascularsmoothmusclecells，VSMCs）Smad4表达的影响，来探讨影响转化生长因子-β（transforminggrowthfactor-β,TGF-β）信号通路的不同因素，从而进一步探讨导致高血压和动脉粥样硬化形成不同病变的作用机制，分析影响粥样斑块稳定性的因素，并期望为动脉粥样硬化的治疗找到新的靶点。方法：取3-10代生长状态良好的VSMCs进行培养，每瓶接种DMEM液5ml（

5、含10%胎牛血清、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素、200mmol/LL-谷氨酰胺），待细胞贴壁生长至70%-80%融合时，改用无血清的DMEM（含0.2%胎牛血清）培养24小时，使其同步化在静止期。然后分为五组：对照组、TGF-β1作用组、AngII作用组、ox-LDL作用组、AngII及ox-LDL联合作用组。按实验方案给予不同浓度药物作用24小时后，采用RT-PCR和westernblot方法检测各组细胞中Smad4基因及蛋白的表达量，用ELISA法检测各组细胞上清液中Ⅰ型胶原的表达，最后利用SPSS13.0软件包对各组数据进行统计学分析，P<0.05被认为差异有

6、统计学意义。结果：RT-PCR和westernblot检测不同浓度TGF-β1（1、5、10μg/L）作用于VSMCs后，细胞中Smad4的表达量均高于对照组（P<0.05），ELISA检测细胞上清液中Ⅰ型胶-7原的浓度高于对照组。在这基础之上，RT-PCR和westernblot检测不同浓度AngII（10、-6-510、10mol/L）作用于VSMCs后，细胞中Smad4的表达量均高于对照组（P<0.05），细胞上清液中Ⅰ型胶原的浓度高于对照组；不同浓度ox-LDL(20、40、80mg/L)作用大鼠VSMCs后，80mg/Lox-LDL组同对照组相比，细胞中Smad4的表达量

7、明显下降-5（P<0.01），细胞上清液中Ⅰ型胶原的浓度低于对照组；以AngII（10mol/L）联合不-5同浓度ox-LDL(20、40、80mg/L)作用大鼠VSMCs后，同AngII10mol/L组相比，联合组Smad4的表达量下降（P<0.05），细胞上清液中Ⅰ型胶原的浓度有所降低。结论：（1）AngII促进大鼠VSMCs中Smad4的表达以及细胞上清液中Ⅰ型胶原的表达,表明AngII对TGF-β胞内信号通路有促进作用；（2）ox-LDL抑制Smad4及细胞上