牙齿卟啉单胞菌菌毛蛋白对血管内皮细胞功能影响的实验研究

《牙齿卟啉单胞菌菌毛蛋白对血管内皮细胞功能影响的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、遵义医学院硕士学位论文牙齿卟啉单胞菌菌毛蛋白对血管内皮细胞功能影响的实验研究姓名：闫小蓉申请学位级别：硕士专业：口腔临床医学指导教师：葛颂201205遵义医学院硕士学位论文牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白对血管内皮细胞功能影响的实验研究中文摘要目的：分析两种IfimA型和llfimA型牙龈卟啉单胞菌(Porph)，romonasgingivalis,Pgingivalis)茵毛蛋白诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)表达和分泌致炎细胞因子、趋化因子和粘附分子及血管活性物质ETol、NO的影响，探讨不同

2、．声，棚型尸gingivalis及其菌毛蛋白在牙周炎影响动脉粥样硬化(atherosclerosis，As)发生发展中的可能作用和效应分子以及牙周炎与As相关的物质基础的可能。方法：l、厌氧培养IfimA型(ATCC33277)、IIfimA型(WCSPlS)Pgingivalis；体外培养HUVECs，待HUVECs单层融合后，分别加入各型不同终浓度的Pgingivalis-rFimA(O．5ug／ml、5ug／ml、10ug／m1)共同孵育2h、6h、24h,ELISA法测定培养上清液中的I

3、L．6、IL一8、IL．1p、TNF—a、MCP一1及ET-1表达水平，硝酸还原酶法测定培养上清液中的NO分泌量，采用RT-PCR法测定IL一6、IL．8、IL．邛、TNF．0【、MCP．1、ICAM．1及VCAM．1mRNA的相对表达量。FCM法测定ICAM—l、VCAM．1的蛋白表达量。结果：(1)本实验研究发现在I型和II型rFimA刺激下，HUVECs表达IL．113、IL．6在三个时间点各实验组与对照组之间差异无统计学意义(胗O．05)；2h，I型和II型rFimA刺激HUVECs表达

4、TNF．0【与对照组之间差异无统计学意义，6h和24tl，II型rFimA刺激HUVECs表达TNF一0【mRNA水平增高，呈现剂量依赖性，II型rFimA诱导HUVECs表达TNF．0【mRNA的能力强于I型rFimA，24h时，I型rFimA刺激HUVECs表达TNF一。【mRNA水平增高，其分泌的蛋白量与mRNA水平一致。(2)2h时I型rFimA和II型rFimA刺激HUVECs表达IL．8mRNA水平实验组与对照组之间差异无统计学意义，6h和24h，I型rFimA和II型rFimA均能

5、刺激HUVECs表达IL．8mRNA水平增强，且II型rFimA刺激HUVECs表达IL．8mRNA水平具有剂量依赖性，同时在24hII型rFimA较I型rFimA刺激HUVECs表达IL．8mRNA能力强，其分泌的蛋白量与mRNA表达水平基本一致；I型rFimA和II型rFimA刺激下，2hHUVECs表达MCP．1mRNA在10ug／ml均有增高，6h，MCP．1mRNA表达达到高峰，在24hMCP．1mRNA表达水平有所降低但仍高于正常水平，MCP．1mRNA表达呈剂量依赖效应，其分泌的蛋

6、白量与mRNA表达水平基本一致(3)2h和6hI型rFimA和II型rFimA刺激HUVECs表达ICAM．1mRNA与对照组之间差异无统计学意义，24h，I型rFimA和II型rFimA刺激HUVECs表达ICAM．1mRNA水平增强，II型6遵义医学院硕士学位论文牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白对血管内皮细胞功能影响的实验研冗rFimA诱导HUVECs表达ICAM．1mRNA能力较I型rFimA强，其分泌的蛋白量与mRNA表达水平基本一致；2h，I型和II型rFimA刺激表达VCAM．1mRNA与阴性

7、对照组比较无统计学意义，6h和24hII型rFimA刺激HUVECs表达VCAM．1mRNA能力增强，I型rFimA刺激HUVECs表达VCAM．1mRNA未检测到增加，在蛋白水平，I型rFiInA和II型rFilI认均未检测出刺激HUVECs表达VCAM．1水平升高，与基因水平表达不一致。(4)血管活性物质：I型和II型rFimA三个时间点均能刺激HUVECsET-1和NO水平升高，II型rFimA较I型rFimA刺激HUVECs分泌ET-1和NO能力强。结论：2型P．gingivalis．r

8、FimA均能刺激HUVEC表达致炎细胞因子TNF．0【，趋化因子IL．8和MCP．1，而且使黏附分子ICAM．1、VCAM．1mRNA转录水平升高，并诱发血管活性物质ET-1、NO的分泌水平增高，不同少，剃基因型Pgingivalis-rFimA对HUVEC功能的影响存在着差异。提示Pgingivalis感染可引起内皮细胞活化和功能紊乱，从而引发内皮细胞的炎症反应，可能在As的发生和发展过程中发挥重要作用。关键词：牙龈卟啉单胞菌／菌毛蛋白、人脐静脉血管内皮细胞、动脉粥样硬化、细胞因子、粘附分子、