鞣花酸对hek-293细胞的dna损伤毒性作用以及可能的氧化应激、溶酶体膜通透机制研究

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1、鞣花酸对HEK一293细胞的DNA损伤毒性作用以及可能的氧化应激、溶酶体膜通透机制研究计：学位论文：37页表格：0个插图：9幅王东指导教师：陈敏副教授申请学位级别：硕士学位专业名称：劳动黠环宽峭论文提交日期：2012年4月论文答辩日期：2012年5月学位授予单位：大连医科大学学位授予日期：2012年6月评阅人：答辩委员会主席：独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其他教

2、育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：L蠹签字日期：坦监』年』月立日关于学位论文使用授权的说明《鞣花酸对HEK一293细胞的DNA损伤毒性作用以及可能的氧化应激、溶酶体膜通透机制研究》系本人在大连医科大学攻读(硕士)学位期间在导师指导下完成的学位论文。本人及指导教师完全了解大连医科大学关于保存、使用学位论文的规定，同意学校保留并向有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版本，允许论文被查阅和借阅，同意学校将本论文加入：1．中国学术期刊(光盘版

3、)电子杂志社——《中国博士学位论文全文数据库》、《中国优秀硕士学位论文全文数据库》及CNKI相关数据库。2．中国科学技术信息研究所——《中国学位论文全文数据库》3．国家图书馆本人授权大连医科大学，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存、汇编学位论文，可以公布论文的全部或部分内容。论文作者签名：指导教师签名：签字日期：也年￡月上日目录一、摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(二)英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3二、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5(一)前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5(一，)日U吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5(二)材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6(三)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9(四)讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17(五)结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22(六)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23三、综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2"／(一)综述⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27(二)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33四、致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37鞣花酸对HEK-293细胞的DNA损伤毒性作用以及可能的氧化应激、溶酶体膜通透机制研究硕士生姓名：王东指导教师：陈敏副教授专业名称：劳动卫生与环境卫生学摘要目的：鞣花酸(Ellagicacid，EA)，是广泛存在于各种具有软果或坚果的植物组织中的一种天然多酚成分。多项研究结果表明，EA具有抗肿瘤、抗氧化、抗炎、抗细胞增殖、抗菌和抗病毒等生物学作用，同时已有研究报道EA具

6、有DNA损伤活性。本研究通过观察EA致HEK．293细胞DNA损伤，探讨EA对DNA损伤可能的毒性机制(氧化应激和溶酶体膜通透)，为评估EA对人类的健康影响提供试验及理论依据。方法：以HEK-293细胞作为试验系统。通过单细胞凝胶电泳试验检测EA引起体外HEK-293细胞的DNA损伤，评价EA的DNA损伤毒性。为探讨其可能的DNA损伤机制，以2’，7’一二氢二氯荧光素(DCFH)和苯二醛(OPT)分别测定细胞内活性氧(ROS)以及还原性谷胱甘肽(GSH)水平，以免疫组化方法检测细胞内8一羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的表达水平，以吖啶

7、橙(Ao)和罗丹明123(Rhodamine123)分别测定细胞内溶酶体膜稳定性和线粒体膜电位的改变水平，通过N一乙酰半胱氨酸(NAC)干预试验观察氧化性损伤对DNA损伤的影响，通过氯化铵(NH4E1)干预试验观察溶酶体膜稳定性对DNA损伤的影响，通过地昔帕明(desipramine，酸性神经鞘磷脂酶的抑制剂)和抑胃肽(pepstainA，组织蛋白酶D的抑制剂)干预试验观察溶酶体内酸性水解酶对DNA损伤的影响。试验结果用SPSSvl1．5统计软件进行统计分析。结果：EA(1209M)作用于HEK．293细胞1小时后，引起DNA链断裂

8、，细胞成彗星样拖尾，与DMSO空白对照组比其尾长明显增长，尾DNA％增大；同时，EA(609M．120pM)作用于HEK-293细胞3h后，可致细胞内8-OHdG的表达水平升高；EA(120pM)作用于HEK．293细胞1小时后，细胞