瘦素基因甲基化与妊娠期糖尿病糖代谢紊乱的实验研究

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1、第三军医大学硕士学位论文瘦素基因甲基化与妊娠期糖尿病糖代谢紊乱的实验研究姓名：辛静申请学位级别：硕士专业：妇产科学指导教师：李真201206第三军医大学硕士学位论文瘦素基因甲基化参与妊娠期糖尿病糖代谢紊乱的实验研究摘要研究背景妊娠期糖尿病(GestationalDiabetesMellitus，GDM)是妊娠期发生糖尿病者(己知有糖尿病而合并妊娠者不包括在内)，主要表现为餐后血糖的异常升高及高胰岛素血症。GDM作为孕期特有的会对母儿造成严重影响的疾病越来越受到重视，对其发病机制的研究多数着眼于胰岛素水平的升高及胰岛素抵抗，而随着对肥胖因子瘦素功能的认识，发现很多组

2、织中瘦素都与胰岛素存在着双向调节作用。在妊娠期糖尿病患者，无论是母体还是宫内的胎儿还存在瘦素的高表达及明显的瘦素抵抗。因此，近年来瘦素在GDM中的作用越来越受到重视。甲基化作为表观遗传学的一种修饰方式，是指在DNA甲基转移酶的催化下使胞嘧啶转变成甲基胞嘧啶(5一mC)的化学修饰过程，可以通过抑制DNA结合蛋白与相应序列的结合、参与基因沉默过程、影响基因转录的延伸过程等方式降低基因的表达。位于人类7号染色体的瘦素基因，其启动子区为组织特异性甲基区，甲基化程度负性调控着基因的表达。本课题旨在通过选用合适的GDM动物模型检测正常鼠及GDM鼠孕前、不同孕期及产后糖代谢、血

3、清中胰岛素和瘦素的水平、肝脏和胎盘组织中瘦素表达与其基因启动子区甲基化的关系。并进一步探索绒毛滋养细胞中瘦素基因启动子区的甲基化及瘦素的表达水平是否受孕激素的影响，为妊娠期糖尿病的发病机制提供理论依据。目的了解瘦素基因启动子区甲基化与妊娠期糖尿病糖代谢异常的关系，从表观遗传学角度探索妊娠期糖尿病的发病机制。方法1、比较C57BL／KsjLeprdb／+d、鼠和正常的C57BL／Ksj鼠孕前、不同孕期及产后的糖耐量及各期血清中胰岛素、瘦素的水平，并对C57BL／KsjLeprdb／+d、鼠能否作为妊娠期糖尿病动物模型进行可行性分析；2、WesternBlot法测定正

4、常鼠与GDM鼠孕前、不同孕期、产后瘦素在肝脏组织6第三军医大学硕士学位论文中的表达和不同孕期胎盘组织中的表达水平，同时了解两种组织中瘦素基因启动子区甲基化情况与瘦素表达的相关性；3、不同孕激素浓度下培养人滋养层细胞，了解孕激素对滋养层细胞瘦素基因启动子区的甲基化及瘦素表达的影响。结果实验一：1．C57BL／Ksjdb“孕鼠较正常孕鼠糖耐量明显降低，空腹胰岛素水平随孕期进展明显升高(P<0．05)，且显著高于同期正常孕鼠，产后恢复正常；(2)C57BL／Ksjdb／+孕鼠血清中瘦素明显高于非孕期(P

5、组织中瘦素的表达高于未孕期(PO．05)，产后降低；而胎盘组织中瘦素的表达随妊娠进展明显增高(尸<0．05)；C57BL／Ksjdb／+孕鼠肝脏及胎盘组织中瘦素的表达都高于同期正常孕鼠(P<0．05)；2．正常及C57BL／Ksjdb／+孕鼠肝脏组织中瘦素基因启动子区甲基化水平与非孕期相比无明显变化；C57BL／Ksjdb／+孕鼠胎盘组织中瘦素基因启动子区的甲基化水平明显低于正常孕鼠。实验三：1．体外培养的人早孕滋养层细胞早期呈现圆形或类圆形状态，随着细胞平铺生长，表现为多边形或长梭形，免疫组化结果显示角蛋白染色阳性、波形

6、蛋白染色阴性的细胞接近95％，可用于后续研究；2．滋养层细胞中瘦素基因启动子区的甲基化水平随培养液中孕酮水平的升高而降低；3．滋养层细胞表达瘦素的水平与孕酮的浓度呈正相关。结论1．C57BL／Ksjdb／+雌鼠糖代谢特点及胰岛素、瘦素的异常表达与妊娠期糖尿病相似，是妊娠期糖尿病良好的动物模型。2．C57BL／融jdb／+雌鼠和正常雌鼠孕期肝脏及胎盘组织中瘦素表达明显升高，胎盘组织中瘦素水平的变化与瘦素基因启动子甲基化水平呈负相关。3．孕激素可降低瘦素基因启动子区甲基化水平，参与滋养层细胞中瘦素表达的调控。关键词瘦素：甲基化；妊娠期糖尿病；孕激素第三军医大学硕士学位

7、论文EffectsoftheleptingenemethylationonglucosemetabolismingestationaldiabetesmellitusAbstractBackground：Gestationaldiabetesmellitus(GestationalDiabetesMellitus，GDM)isatypeofdiabetesorabnormalglucosetoleranceduringpregnancy(exceptthosewhohavediabetesandthenpregnancy)characterizedbyabnorm

8、alele