同基因骨髓造血干细胞移植免疫重建诱导小鼠皮肤移植免疫耐受的初步研究

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1、江苏大学硕士学位论文同基因骨髓造血干细胞移植免疫重建诱导小鼠皮肤移植免疫耐受的初步研究姓名：周庆申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：徐三荣20120616江苏大学硕士学位论文摘要目的：探讨小鼠异基因皮肤移植后接受清髓性预处理，通过受体同基因骨髓造血干细胞移植重建免疫系统诱导皮肤移植物免疫耐受的可行性。方法：1、建立皮肤移植模型：受体雌性BALB／c小鼠随机分为2组，A：同基因移植组，BALB／c．BALB／c；B：异基因移植组，C57B啪．BALB／c。通过观察移植皮肤形态变化及成活时间验证皮

2、肤移植模型的可靠性。2、建立免疫重建模型：受体雌性BALB／e小鼠随机分为3组，A：空白对照组；B：全身照射(TBI)组；C：TBI+骨髓移植(BMT)组。受体小鼠接受致死剂量直线加速器射线全身照射，TBI后4--6小时内经尾静脉注射供体雄性BALB／c小鼠骨髓细胞。通过观察TBI后各组小鼠一般情况变化和存活时间，检测外周血白细胞及血小板计数，脾细胞对刀豆蛋白A(ConA)的增殖反应能力，PCR检测受体内性别决定基因Sry基因初步检测免疫重建水平。3、同基因骨髓造血干细胞移植免疫重建诱导皮肤移植免

3、疫耐受：受体雌性BALB／c小鼠随机分为4组，A：移植对照组：B：环孢霉素A(CsA)鲥l；C：CsA+TBI组；D：CsA+TBI+BMT组。受体BALB／C小鼠接受供体C57BL／6小鼠皮肽移植，皮肤移植当天争术后第7天f旺人腹腔注射CsA，第8人接受敛夕匕剂毋的+“线加速器射线个身照射，4---6小时内通过尾静脉i}射受体l叫基I大I骨{ijii细胞。通过记I江苏大学硕士学位论文录皮肤移植物存活时间、观察皮肤移植物HE染色组织学改变、单向混合淋巴细胞反应(MLR)检测免疫耐受的效应；TBI后

4、记录小鼠生存率及外周血白细胞计数检测免疫重建情况。结果：1、同基因移植组，除1例皮肤移植物因抓咬死亡，其余存活良好；异基因移植组，除l例皮肤移植物在术后7天因皮下淤血死亡，其余在9""14天内因排斥反应死亡，两组手术成功率为93．33％。2、B组小鼠在TBI后12天内全部死亡，而C组小鼠除1只于TBI后第6天死亡，其余长期存活，其白细胞数与血小板数在TBI后第7天均降到最低，之后持续性增高，第2l天时白细胞数与A组比较无显著差异(尸>O．05)，而血小板数达到正常值水平：第2l天时C组淋巴细胞对C

5、onA增值反应能力与A组比较无显著差异(尸>O．05)：第28天时C组体内均能检测到Sry基因。3、存活时间：A、B组未接受TBI均存活良好，C组小鼠在TBI后6~lO天内全部死亡，而D组小鼠在观察期间存活良好；外周血白细胞计数：C组白细胞数呈持续性降低直到全部死亡，D组于TBI后第6天时降至最低点，之后持续上升，于第l8天达到B组水平；皮肤成活时间：D组移植皮肤平均存活时间为34．9天，显著长于各对照组(尸

6、性排斥反应，淋巴细胞浸润较少，组织结构清晰；混合淋巴细胞反应：D组小鼠脾细胞对供体小鼠脾细胞增殖反应显著降低，而对第三方小鼠脾细胞增殖反应与A组和B纠I比较无显著差异(尸>O．05)。江苏大学硕士学位论文结论：1、采用背．背皮肤移植可建立稳定的小鼠皮肤移植模型。2、通过直线加速器射线小鼠全身照射后受体同基因骨髓移植可建立免疫重建模型。3、皮肤移植后直线加速器射线全身照射，利用受体同基因骨髓移植重建免疫系统可显著延长小鼠皮肤移植物存活时间，可诱导供体特异性免疫耐受。受关键词：造血干细胞，骨髓移植，皮

7、肤移植，免疫重建，免疫耐江苏大学硕士学位论文ABSTRACTObjective：Tostudythepossibilityofusingsyngeneicbonemarrowhematopoietiestemcellstoreconstituteimmunesystemandinducetransplantationtolerancetofullymismatchedskinallograflsinmice．Methods：1．Skintransplantationmodels：recipient

8、soffemaleBALB／cmiceweredividedrandomlyintotwogroups，A：Syngenictransplantationgroup，BALB／c—BALB／c，B：Allogeneictransplantationgroup，C57BL／6一BALB／c．Theskinmorphologyfeatureandsurvivaltimewererecordedtoverifythereliabilityofthemodelsofskintranspla