双酚a急性暴毒对斑马鱼神经和肌肉的影响

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1、温州医学院硕士学位论文双酚A急性暴毒对斑马鱼神经和肌肉的影响姓名：王学春申请学位级别：硕士专业：中药学指导教师：黄长江2012-05-19温州医学院硕士学位论文双酚A急性暴毒对斑马鱼神经和肌肉的影响摘要双酚A(BisphenolA，BPA)，是一种具有弱雌激素活性的环境内分泌干扰物，它作为食品和饮料的碳酸聚酯包装材料、金属罐头的树脂内膜、牙齿固封剂以及其他产品的添加剂，而被大量使用。BPA类似于雌激素，对雌激素受体具有一定亲和力。BPA进入生物体后与细胞内雌激素受体结合，通过多种机制产生拟雌激素作用，从而干扰内分泌系统的正常功能，对生物体产生多方面的影响。

2、国内外有大量的文章研究了其生殖毒性，但对其神经毒性的研究比较少，一般用培养的神经细胞来研究，用生物个体来研究神经毒性的文章更少。国外有研究认为在脑发育过程中，BPA能影响脑内雌激素合成的关键酶(芳香化酶)的表达和活性，还能改变不同脑区雌激素受体(ER-O【和ER-B>的表达，并因此能放大或干扰雌激素对脑发育的调节作用。本文用斑马鱼为模式生物，研究BPA暴毒后对斑马鱼幼鱼的自主运动，触摸反应、游泳活力的影响。接着研究BPA暴毒后改变神经轴突发育，肌丝的形态，DNA稳定性和细胞凋亡。BPA对斑马鱼自主运动能力的影响，触摸反应，行为活力实验的研究中，设置了1山、

3、5山、15州三个浓度组与DMSO(0．1％)对照组。研究表明，15州的BPA暴毒降低了斑马鱼胚胎27hpf的自主运动，但其他两个处理组对斑马鱼自主运动的影响不明显。对触摸反应和行为活力的影响，随着时间的推移，不仅表现为48hpf，151上M的BPA暴毒对斑马鱼的触摸反应有影响，而且还表现为不仅15山，1州和5州的BPA暴毒到96hpf，120hpf能引起斑马鱼运动速度的显著减慢。为研究BPA暴毒影响斑马鱼行为的原因，斑马鱼胚胎从6hpf开始进行暴毒至27，48，72，96hpf。用免疫组化方法研究27hpf的初级运动神经元轴突的发育情况，48hpf和72h

4、pf斑马鱼次级运动神经元轴突的生长发育。研究发现，27hpf的15肛M的BPA暴毒组斑马鱼，初级运动神经元轴突发育迟缓，48hpf和72小时15pM的BPA暴毒组，次级运动神经元轴突发育不但推迟还伴有增生。96hpf的幼鱼进行肌肉透射电镜后发现，三个暴毒组肌丝都有松弛的现象，其中15uM的BPA暴毒组甚至还出现了肌丝断裂和线粒体聚集。吖啶橙染色后利用荧光强度分析96hpf幼鱼细胞凋亡情况，结果显示暴毒组的吖啶橙染色后荧光强度比对照组显著升高。为了进一步研究凋亡的部位，本实验用TUNEL原位细胞染色法检测凋亡的部位和凋亡细胞的数量。染色后经过共2温州医学院硕

5、士学位论文聚焦显微镜扫描，对图片进行凋亡细胞数量分析后，结果显示5州和15出的BPA暴毒后，细胞凋亡较对照组要多，但llxM的实验组与对照组相比，并没有显著地差异。进一步对凋亡相关酶和基因进行研究后发现：159M的BPA暴毒到96hpf，Caspase．3酶活性，活性氧(ROS)，细胞凋亡的促进基因BAX均有显著升高，但抑制基因BCL．2没有影响。因此得出：BPA暴毒后影响斑马鱼细胞凋亡。通过彗星实验，llxM、son、15脚的BPA暴毒到96hpf，与对照组相比，DNA的稳定性不如对照组。最后得出：可能由于DNA不稳定和ROS的浓度上升导致了细胞的凋亡，

6、神经轴突的延迟发育和肌丝的松弛。关键词：斑马鱼；神经毒性；行为；DNA损伤；凋亡温州医学院硕士学位论文BisphenolAeffectsonzebrafishnerveandmuscleAbstractBisphenolA(BPA)，iSakindofenvironmentalendocrinedisruptorswithweakestrogenicactivity,Aspackagingmaterialsoffoodandbeverageofcarbonicacidpolyester,metalcans，toothfixingagentresinlini

7、ng，andadditiveofotherproducts，iswidelyused．BPAissimilartoestrogenandestrogenreceptorhascertainaffinitytoit．BPAentersthebodyandbindsintracellulares扛ogenreceptorthroughavarietyofmechanismstoproduceestrogenic，andthendisruptstheendocrinesystemfunctionandproducesmultipleeffects．Alargen

8、umberofdomesticandforeignarticles