天然产物分析实验报告

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1、天然产物活性成分检测实验报告姓名：李雪怡学号：2012332870009年级班级：12生物制药（1）班实验一：茶叶中茶多酚的粗提取与含量测定一、实验目的：1、了解并熟悉茶多酚的元索组成、结构构成、理化性质。2、掌握溶剂萃取法粗提取茶多酚的原理与操作。3、掌握酒石酸铁比色法测定茶多酚的含量的原理及操作。4、了解分光光度计的使用方法和注意事项。二、实验原理和应用：茶多酚(TeaPolyphenols)是茶叶屮多酚类物质的总称，包括黄烷醇类、花色井类、黄酮类、黄酮醇类和酚酸类等。其中以黄烷醇类物质(儿茶素)最为重婆。茶多酚又称茶糅或茶单宁，是形成茶叶色香味的主要成份之一，也是茶叶中有保健功

2、能的主要成份之一。研究表明，茶多酚等活性物质具解毒和抗辐射作川，能有效地阻止放射性物质仪入骨髓，并可使锂90和钻60迅速排出体外，被健康及医学界誉为“辐射克星”。目前国内外茶多酚粗品的提取的方法主要冇：溶剂萃取法、离了沉淀法、树脂吸附分离法、超临界流体举取法、超声波浸提方法、微波浸提法等等。在这些提取茶多酚的方法小，每种方法都冇它各自的针对性和使川范围，使川时要根据各自的情况而定。根据实验室的条件及实验要求，本实验采用溶剂萃取法对干茶叶屮的茶多酚进行粗提取，即利川茶多酚易溶于乙酸乙酯等有机溶剂的原理进行液•液萃収。茶多酚的测定方法冇高猛酸钾直接滴定法和酒石酸铁比色法，由于高猛酸钾直接

3、滴定法操作比较复杂，且靠肉眼观察颜色判断终点，如果样品溶液颜色较深时，可能影响测定结果。本实验将应用酒石酸铁比色法测定茶多酚的含量。酒石酸铁能与茶多酚牛成紫褐色络合物,络合物溶液颜色的深浅与茶多酚的含量成正比。因此对以用比色方法测定。该法可避免高猛酸钾滴定法所产生的人为视觉谋差。三、实验仪器、材料和试剂实验仪器：分光光度计、干燥箱、电了天平、pH计、真空泵、纱布、漏斗•、旋转蒸发仪、250ml容量瓶、50ml容量瓶、分液漏斗实验材料：干茶叶(市售散装茶即可)实验试剂：硫酸亚铁(FeSO4・7H2O),酒石酸钾钠(KNaC4H4O6・4H2O),磷酸氢二钠(Na2HPO4・12H2O)

4、,磷酸二氢钠(NaH2PO4・2H2O),乙酸乙酯。四、实验操作1、溶液的配制酒石酸亚铁溶液制备：称取0.25g（准确至0.0001）硫酸亚铁，1.25g酒石酸钾钠（准确至0.0001）,用水溶解并定容至250ml（低温保存,有效期10天）。2、干茶叶的预处理将干茶叶洗净、晾干，烘干，最后粉碎。粉碎的II的是与液体的接触面增大使提取率增高。由于试验条件的限制，用剪刀代替粉碎机将干茶叶剪碎，并且用研钵研细，干茶叶量为50.00go3、茶多酚的粗捉取与定性检测称取经过预处理的干茶叶末30.00g，加入250mL90°C接近沸水屮搅拌浸提、过滤，先后用250mL的乙酸乙酯萃取两次。合并两次

5、冇机相。减压蒸啊除去乙酸乙酯溶剂得黄色粉末状茶多酚。从外观上看，为黄色粉末状。物理性能为，易溶于水及乙醇，味苦涩。图1高浓度茶多酚样品（98%）4、茶多酚溶液的配置与含量的测定称取步骤3中捉取的茶多酚粉末0.2500g,加水溶解定容至250mL,混匀,即为每毫升含lmg步骤3中提取的茶多酚粉末的溶液。分别取茶多酚溶液l.OmL、2.0mL、3.OmL、4.OmL于4个50mL容量瓶中，各加水至10mL,再加酒石酸亚铁溶液lOmL,加入pH为7.5的磷酸缓冲液至刻度，混匀后用lcm比色I1IL,以空白试剂作参比，于波长540nm处测定吸光度A,计算实验数据，并绘制实验数据表格。0)=X

6、100%4x3.913Tx1000Vxm3—茶多酚的含量（％）,A—样品溶液的吸光度值，T—样品溶液的总体积（mL）V—测定用样品溶液的量（mL）,m—样品质量（g）3.913—用lcm比色杯，当吸光度为1.0吋，试液中茶多酚的浓度为3.913（mg/mL）表1实验数据汇总实验次数AT(mL)V(mL)m(g)co(%)o)(mg/g)10.10425010.250040.7026.6120.22325020.250043.6338.5430.36225030.250047.2247.2240.46325040.250045.2945.295、实验结果检验——绘制茶多酚标准曲线根据步

7、骤4中所得的实验数据，绘制茶多酚标准llh线，斜率R处于0.95-1.05之I'可方可达到实验要求。表2绘制标准Illi线所需数据V(mL)1.02.03.04.0A0.1040.2230.3630.463(J(mg/g)40.7043.6347.2245.29图2茶多酚标准Illi线（例）茶多酚标准曲线Wil——系列1—线性（系列1）—线性（系列1）86420864444433O.3O.试验中，第四组偏差鮫大舍去。得到R2介于0.95〜1.05,符合耍求