全反式维甲酸诱导大鼠肠神经系统发育异常的实验研究

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1、分类号：R6单位代码：10752密级：公开学号：2009287宁夏医科大学硕士研究生学位论文全反式维甲酸诱导大鼠肠神经系统发育异常的实验研究ExperimentalstudyonthedevelopmentalabnormalitiesofEntericnervoussysteminratsinducedbyAll-transretinoicacid学位申请人：刘燕雄指导教师：单振潮教授申请学位门类级别：医学专业名称：外科学研究方向：先天性肠道发育畸形所在学院：临床医学院论文完成日期：二〇一二年四月宁夏医科大学研究生院NingxiaMedicalC

2、ollegeThesisforApplicationofMasterDegreeExperimentalstudyonthedevelopmentalabnormalitiesofEntericnervoussysteminratsinducedbyAll-transretinoicacidStudent’sName:LiuyanxiongSupervisor:ShanzhenchaoAssistantsupervisor:SubjectCategory:MedicineMajor:SurgerySpecialty:Congenitalintest

3、inaldevelopmentaldeformitySchool:ClinicalCollegeCompletionDate:Apr2012宁夏医科大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学关于学位论

4、文使用授权的声明宁夏医科大学有权保留使用本人学位论文，同意学校按规定向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权宁夏医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学硕士学位论文摘要全反式维甲酸诱导大鼠肠神经系统发育异常的实验研究摘要目的利用全反式维甲酸（all-transretinoicacid,ATRA）制作大鼠

5、肠神经系统（Entericnervoussystem）发育异常的动物模型，应用蛋白基因产物9.5（proteingeneproduct9.5,PGP9.5）及突触素(synaptophysin,SYP)动态观察ENS在胚胎发育过程的阳性表达及变化并进行透射电镜超微结构研究，以期了解ENS发育及ATRA是否诱导ENS异常发育，为临床防治ENS发育异常诱发的疾病提供实验基础。方法1.实验一40只健康成熟未孕的SD雌鼠，体重250～300g，由宁夏医科大学实验动物中心提供。雌雄大鼠按1：1比例于午夜合笼，上午8:10-9:10时检测有阴道栓排出的雌鼠，即

6、认为已交配，此日标为妊娠第0天（Embryonicday0，E0），正常饲养。将已孕雌鼠30只随机分为2组，每组15只。实验组于E10将ATRA按100mg/kg一次性灌胃；对照组于E10给予体积(2.5mL/kg)橄榄油，继续饲养。两组分别于E14-20腹腔麻醉下行剖宫术。检查判定所有胚胎存活数量及畸形并记录。制作结直肠段标本，行HE常规染色及PGP9.5和SYP免疫组化。已知阳性切片作阳性对照，磷酸盐缓冲液代替一抗作空白对照。图像分析、采图、数据记录分析。2.实验二已孕母鼠8只随机分为2组，每组4只。实验组于E10将ATRA按100mg/kg灌

7、胃；对照组于E10给予体积(2.5mL/kg)橄榄油，继续饲养。两组于E21腹腔麻醉下行剖宫术。制作结直肠电镜标本，预切片定位，超薄切片，透射电镜观察，拍片记录分析。结果1、免疫组织化学：（1）对照组:E16，在直肠肠壁内可见散在稀疏分布的棕色PGP9.5阳性细胞，直肠上端结肠壁内未能见SYP阳性细胞。从E16-18，PGP9.5环肌浆膜侧出现阳性细胞，成散在单个出现，粘膜下阳性细胞少见。直肠壁内可见SYP棕黄色成条索状的阳性表达，I宁夏医科大学硕士学位论文摘要主要分布在肠壁浆膜下层。E20，PGP9.5阳性细胞呈黄褐色团簇状，环肌层和纵肌层结构清

8、晰，排列整齐，粘膜下可见阳性细胞。SYP在E20阳性表达增强。（2）实验组:E16直肠肌间组织开始分化，结构整齐，PGP9