人nkt细胞淋巴瘤吉西他滨耐药细胞株的建立和差异基因表达检测

《人nkt细胞淋巴瘤吉西他滨耐药细胞株的建立和差异基因表达检测》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、郑州大学硕士学位论文人NK/T细胞淋巴瘤吉西他滨耐药细胞株的建立和差异基因表达检测姓名：陈新峰申请学位级别：硕士专业：肿瘤学指导教师：张明智201205摘要人N到T细胞淋巴瘤吉西他滨耐药细胞株的建立和差异基因表达检测研究生：陈新峰导师：张明智郑州大学第一附属医院肿瘤科河南郑州450052背景恶性淋巴瘤(MalignantLymphoma，ML)是起源于人类免疫系统细胞及其前体细胞的恶性增生性疾病。根据临床病理类型可以分为霍奇金淋巴瘤(Hodgkin’Slymphoma，HL)和非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’slymphoma，NHL)。在恶性肿瘤中，我国ML发病

2、率呈逐年上升趋势，非霍奇金淋巴瘤是目前发病率增长最快的肿瘤，其发病率居全世界第五(女性)或第六(男性)位。已成为严重威胁着人类健康和生命的一种疾病。在中国从2000年1月到2008年12月6382例淋巴瘤患者被收集，其中成熟B细胞型占56％，成熟T细胞型和NK细胞型占26％，前驱恶性淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤约占5％．13％。排前六的淋巴瘤中NK／T细胞淋巴瘤仅次于弥漫大B细胞淋巴瘤位于第二，同世界其他地区相比，亚洲尤其是中国发病率高，同其他报道相似。NK／T细胞淋巴瘤(NaturalKiller／Tcelllymphoma)是非霍奇金淋巴瘤的一个亚型，发病率居T细胞淋巴瘤的首

3、位，中国发病率远高于西方国家。该病具有起病隐匿、早期诊断困难、高度侵袭性、进展速度快、生存期短、预后较差等特点，早期采用放化疗，中晚期主要是采用化疗为主的综合治疗。目前国际上对于NKfr细胞淋巴瘤尚无标准的治疗方案，因此寻找高效低毒且不易产生耐药的化疗药物势在必行。大量的临床研究证明，以吉西他滨为主的化疗方案对非霍奇金淋巴瘤的疗效确切。同时我们的前期研究通过常规化疗药物敏摘要感试验发现NK厂r淋巴瘤细胞株SNK．6、YTS对吉西他滨高度敏感，吉西他滨有可能成为有效治疗Nl沂细胞淋巴瘤的药物，但Nl叩细胞淋巴瘤细胞对化疗药物多药耐药是影响化疗疗效的主要因素，NK／T细胞淋巴

4、瘤患者原发或继发耐药一直困扰着临床医生，于是本课题选择采用体外药物浓度梯度递增法建立NK厂r细胞淋巴瘤吉西他滨耐药细胞株YTS．Gem，为进一步研究NK／T细胞淋巴瘤的发生发展和耐药产生机制提供了理想的模型，同时本课题发现的基因表达差异，为N妍细胞淋巴瘤的基础和临床研究提供了重要的研究线索。目的建立人NK／T细胞淋巴瘤细胞株(YTS)吉西他滨(Gcmcitabinc，Gem)耐药细胞株wrs-Gem)，研究其生物学特性，检测YrS和YrS—Gem的基因表达差异，探讨N列T细胞淋巴瘤耐药机制。方法应用体外细胞培养技术对Y，rS细胞进行体外培养，采用吉西他滨体外浓度梯度递增法

5、建立可以稳定传代的YTS．Gem。光镜观察形态学变化、M1q"法分析耐药指数、绘制生长曲线、计算倍增时间以及流式细胞仪分析YTS、YrS．Gem的细胞周期分布及表面标记物；采用荧光实时定量PCR(Real．timePCR)检测细胞周期相关基因C硒p弱e，细胞凋亡相关基因p53、肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体基因(TRAIL)和髓样细胞白血病．1基因(Mcl．1)，合成、修复和重组相关基因核糖核苷酸还原酶亚单位M1和M2(RRMl和RRM2)，细胞代谢相关基因脱氧胞苷激酶(dCK)和脱氧胞苷脱氨酶dCDA，耐药相关基因多药耐药基因1(mdr-1)、肺耐药基因(u汗)和多药耐

6、药相关基因(MRP)，比较上述基因在YTS和YTS．Gem的基因表达差异。结果1成功建立了人NK／T细胞淋巴瘤耐药细胞株YTS．Gem，YTS．Gem与YTS同源。II摘要2与YTS相比，具有不同的生物学特性：YTS和YTS．Gem对吉西他滨的IC50值分别为0．04999／mL和1．960rtg／mL,耐药指数达到了40；与YTS相比生长速度变慢，倍增时间分别为41．36h和51．17h；与YTS相比，YTS．GemG0／G1期细胞比例减少、S期细胞比例增多、GMM期细胞无明显变化，组间比较差异有统计学意义(P<0．01)。3Real．timePCR检测结果显示：Mcl

7、．1、p53、MRP、dCDA、RRMl及RRM2在YTS．Gem的表达明显升高(P<0．05)，dCK、Caspase、TRAIL在YTS．Gem的表达明显降低(P<0．05)，而mdr．1、LRP在YTS及YTS．Gem中表达无明显差异(P>0．05)。结论1成功建立了人NK厂r细胞淋巴瘤耐药细胞株YTS．Gem。2YTS．Gem具有不同于正常NK厂r细胞淋巴瘤细胞株YTS的生物学特征，两者之间有广泛的差异表达基因，包括细胞周期相关基因、细胞凋亡相关基因、合成和修复相关基因、细胞代谢相关基因以及耐药相关基因。关键词：人NK