丝氨酸苏氨酸蛋白磷酸酶2a在mtor信号通路中的基因表达研究

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1、浙江大学硕士学位论文丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶2A在mTOR信号通路中的基因表达研究姓名：王宝宝申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：何强20120228浙江大学硕士学位论文．中文摘要背景：丝氨酸／苏氨酸蛋白磷酸酶2A在mTOR信号通路中的基因表达研究浙江大学医学院内科学(肾内科)硕士研究生导师王宝宝何强中文摘要雷帕霉素作为一种免疫抑制剂，其作用靶点mTOR是细胞增殖、生长、存活的中心控制者。在生长因子及营养物质的刺激下，mTOR通过下游效应因子调节翻译相关的蛋白及核糖体的生成和功能进而影响细胞周期

2、。雷帕霉素通过抑制mTOR的活性导致T淋巴细胞的Gl期停滞及阻止其他细胞从G1期进入S1期，因而在临床上具有免疫抑制及抗肿瘤效应。蛋白磷酸酶2A(PP2A)是真核细胞中广泛存在的ser／]m蛋白磷酸酶，可对多种细胞蛋白脱磷酸化，从而对多种反应起到精细的调控作用。由催化亚基c(35KD)和支架亚基A(65l①)组成的核心酶与B亚基形成的三聚体ABC是细胞中PP2A的高度动态形式，因为B亚基至少有26个成员，分别属于B、B’、B“、B怫四个亚族。PP2A功能的发挥和调节依赖于亚基之间的相互作用及翻译后修

3、饰。目前研究发现PP2A是mTOR信号通路中的一个组成部分。用雷帕霉素抑制mTOR后可引起PP2A相关的一系列磷酸化／去磷酸化事件，包括S6K1，4E．BPl，ⅢK-l以及ERKl／2等。目前关于雷帕霉素对PP2A酶活性的影响存在很大的争议，也是研究的热点。然而，很少关于PP2A基因表达的报道。因此我们研究的主要目的是探索雷帕霉素对PP2A转录水平的影响，从而使我们更好地理解PP2A在mTOR信号通路中的作TT浙江大学硕士学位论文中文摘要用。目的：分析雷帕霉素作用于J咄atT淋巴细胞的过程中，PP2

4、A各主要亚基的转录表达变化，以明确PP2A是否参与了mToR信号通路，及其在这个过程中的mRNA变化。，方法：用不同浓度的雷帕霉素(oI州，1011M，100IlM，500心D处理J僦T淋巴细胞至12h，24h及48h。用四甲基偶氮唑盐(M田比色法检测T细胞的增殖及活力，应用ImPCR检测PP2A各主要亚基(Aa，Ap，PR55a，PR556，PR61％PR70，Ca及Cp)的m砌妊表达。使用SPSSl6．0统计软件进行分析，计量资料实验数据以x士s表示，数据录入SPSSl6．0完成统计分析。以户<

5、O．05为有统计学差异，尸<0．001为有显著统计学差异。结果：雷帕霉素对Jurkat细胞生长及活力有明显的抑制作用，48小时药物的50％抑一制浓度是343．3州。雷帕霉素对PP2A基因表达也有剂量和浓度依赖效应：50021M雷帕霉素作用细胞不同时间后，PP2A各亚基mRNA的表达在48h明显下降；而用不同浓度的雷帕霉素处理Jurkal细胞48h后，各亚基转录水平也明显下降，且大部分亚基在100一500洲范围内降到最低。结论：’：i本实验以人JurkatT淋巴细胞系为对象，研究雷帕霉素对体外共培养T

6、细胞的作用。研究结果表明雷帕霉素在体外可以抑制T细胞增殖及活力。在这个过程中伴有PP2A基因的改变，说明雷帕霉素可能通过影响PP2A表达，进而通过改变其活性对T淋巴细胞发挥作用，这不仅使我们更深入了解mToR的作用机制，同时PP2A相关蛋白也可能为我们提供预防免疫排斥的新靶点。关键词：PP2A；雷帕霉素；mTOR；移植排斥Tn浙江大学硕士学位论文英文摘要RapamycininhibitingJurkatTcellsViabilitythroughchangingmRNAexpressionofser

7、ine／threonineproteinphosphatase2AKidneyDiseaseCenter，TheFirstAf矗1iatedHospital，CollegeofMedicine，ZhejiangUmVersi够Pos蟾raduateBao—BaoWangSupervisorQiang—HeAbstractIntroductiOn：Rap狮ycillisarelatiVelynewimm加osuppressam．ninllibitsnlemammalianta培etofrap锄y6i1

8、1(mTOR)whichisacentralcontrollerofcellprolif．eration，growmandsurviVal．111responset0印wtllf．actorsa11dn删矗ents，mTORregulates姗lslationiIlitiationa芏ldcellcyclebya能cting仃aIlslatiomlregulators．Rap锄ycincouldcauseGlarrestofTcellsandblockGlt0Spha