丝氨酸-苏氨酸激酶15蛋白在结肠癌的表达

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1、丝氨酸/苏氨酸激酶15蛋白在结肠癌的表达　　关键词:结肠肿瘤；蛋白质，丝氨酸；苏氨酸激酶；免疫组织化学；基因表达　　A:正常肠黏膜细胞质内未见棕黄色染色;B:低分化结肠癌细胞质内未见棕黄色染色;C:高分化结肠癌细胞质内见棕黄色染色.　　图1丝氨酸/苏氨酸激酶15蛋白在结肠黏膜上皮细胞的表达(DAB染色,苏木精衬染×200)（略）　　Fig1TheexpressionofSTK15incolorectalmucosaepithelium　　研究表明，丝氨酸/苏氨酸激酶15(STK15)在肿瘤中的过表达与细胞中心体的异常扩增及恶性转化密切相关，且过表达与

2、肿瘤的某些生物学行为相关联[12]。笔者用免疫组织化学技术检测102例结肠癌组织中STK15蛋白的表达，分析其与结肠癌临床病理学指标间关系，试图阐明STK15蛋白在结肠癌发生发展中的作用。　　1对象与方法　　1.1对象选择2004年4月～2005年12月结肠癌患者的手术切除存档蜡块标本,每例均有癌旁组织作为对照，所有患者术前未作放疗或化疗。所有标本为４%甲醛固定,常规石蜡包埋。102例中,男性58例，女性44例，年龄（59.5±4.1）岁（27～78岁）。所有病例临床及病理资料完整，包括结肠癌70例，直肠癌32例；病理学分级67例高/中分化，35例低

3、分化（黏液癌11例，印戒细胞癌8例）；淋巴结转移阴性68例，阳性34例；Dukes分期：A期24例，B期33例，C期24例，D期21例。　　1.2方法标本作3～5μm连续切片，进行免疫组织化学(SP法)测定。兔抗人STK15多克隆抗体购自美国SantaCruze公司，免疫组织化学SP试剂盒和DAB显色试剂购自福州迈新生物技术开发有限公司。依常规免疫组织化学方法,按试剂盒说明书操作,取所售阳性对照片同步操作作阳性对照；用PBS代替一抗作阴性对照。DAB显色STK15的表达强度分为：（）3分，（+）2分，（±）1分，（-）0分。STK15按表达阳性细胞百

4、分率分为4组：<25%细胞阳性（1分），25%～49%细胞阳性（2分），50%～75%细胞阳性（3分），>75%细胞阳性（4分）。最终分数按以上表达强度及阳性率两个参数的乘积计算，将所有病例分为STK15阴性（最终分数0～6分）及阳性（最终分数7～12分）。切片苏木精对比染色。封片后由两位资深病理科医师在双盲情况下评价随机选择的10个高倍镜视野。　　1.3统计学处理应用SPSS11.0软件包进行统计，采用卡方检验，P<0.05为差别有统计学意义。　　2结果　　2.1免疫组织化学检测STK15表达主要位于结肠癌细胞，癌旁组织上皮及间质

5、细胞不表达或弱表达，STK15在结肠癌组织中的阳性率为44.12%(45/102)，明显高于癌旁组织2.94%(3/102)(P<0.01)，阳性表达位于肿瘤细胞质中（图1）。　　表1STK15表达与结肠癌临床病理特征的关系（略）　　Tab1Relationshipbetetersincolorectalcarcinomas　　STK15：丝氨酸/苏氨酸激酶15蛋白.组间比较，☆：P<0.05.　　3讨论　　人类STK15基因，又称AuroraA、BTAK、STK6，定位于20号染色体，cDNA长约1.8kb,编码一403个氨基酸的蛋白质

6、，属丝/苏氨酸激酶家族[3]。研究显示，人类STK15基因编码一种中心体复制相关激酶，参与调节中心体成熟、G2/M期转换、双极纺锤体的建立以及染色体的分离等有丝分裂事件[45]，近来陆续发现其在多种恶性实体瘤中存在过表达，可能影响DNA和中心体的复制，引起基因组不稳定，导致细胞增殖紊乱，参与肿瘤的发生和发展过程。　　笔者的研究提示，STK15蛋白在结肠癌中存在过表达，癌组织中的水平明显高于正常癌旁组织，表明STK15蛋白在结肠中可能与其他实体瘤类似，其过表达与结肠癌的发生有着一定程度的关联。STK15过表达的原因可能有以下几种机制[2,67]：（1）

7、STK15基因本身的扩增，造成mRNA及蛋白质的增加。（2）STK15基因DNA无发生变化，但mRNA水平明显上升，具体原因尚未完全明了。（3）STK15蛋白的抑制因子――p53基因突变，导致p53蛋白对STK15蛋白抑制作用减弱，野生型p53蛋白依靠氨基酸的特定序列与STK15蛋白结合并阻断其作用，恶性肿瘤患者由于p53基因常发生突变，导致对STK15蛋白阻断作用消失，最终造成STK15表达量均上升。笔者推测，由于STK15基因对细胞增殖起正调控作用，STK15在结肠癌中的过表达，同样可能引发结肠黏膜上皮细胞中心体的异常复制、细胞的分裂异常及恶性转

8、化，参与结肠癌的发病过程。　　进一步的研究还发现，STK15与结肠癌的分化存在密切的关联。Kamada等报道