丝氨酸苏氨酸蛋白激酶和p38丝裂原活化蛋白激酶途径调节水通道蛋白3和9的表达-论文.pdf

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1、中华肝脏病杂志2013年10月第2l卷第10期ChinJHepatol，October2013，Vo1．21，No．10·753·油酸通过磷脂酰肌醇-3激酶／丝氨酸苏氨酸蛋白激酶和p38丝裂原活化蛋白激酶途径调节水通道蛋白3和9的表达顾陆昀邱烈旺陈小凤吕琳梅浙【摘要】目的研究油酸在非酒精性脂肪变性肝细胞模型中诱导水通道蛋白3(AQP3)和AQP9表达改变的相关信号转导机制。方法采用油酸干预人肝癌HepG2细胞构建非酒精性脂肪变性肝细胞模型，油红0染色及吸光度值测定分析其脂肪变性程度，通过实时定量聚合酶链反应与Westernblot检测A

2、QP3和AQP9表达改变情况；以常规培养的细胞为对照组，联合油酸及不同信号通路抑制剂诱导HepG2细胞，实时定量聚合酶链反应和Westernbl0t方法检测AQP3和AQP9在非酒精性脂肪变性肝细胞模型中表达改变的相关信号分子机制。多组问数据比较采用单因素方差分析，两组间数据比较采用独立样本t检验。结果随着油酸刺激浓度的升高(0、250、500mol／L)，肝细胞内脂肪变性程度增加，AQP3mRNA表达逐渐下降，而AQP9mRNA水平逐渐升高，油酸500mol／L刺激下二者变化均最为明显，分别为0．47±0．18和1．57±0．21，与

3、0mol／L组比较，差异均有统计学意义(t值分别为4．5450和3．0306，尸值均<0．05)；蛋白质水平检测结果与之一致。油酸联合磷脂酰肌醇一3激酶抑制剂LY294002处理后，AQP9mRNA水平升高到4．55±0．62，与对照组的1．00±0．10、油酸单独干预组的2．43士0．53和LY294002单独干预组的1．90±0．16相比，差异均有统计学意义(f值分别为9．7909、4．5018和7．1683，尸<0．01或尸<0．05)。p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂SB203580干预可使被油酸抑制的AQP3m

4、RNA水平恢复到与对照组相近水平(1．27±0．11)，AQP9mRNA则从油酸明显上调的水平下降到0．38±0．09，与干预前相比，差异均有统计学意义(t值分别为5．7455和6．5727，P值均<0．01)。细胞外信号调节激酶抑制剂PD98059和c-JunN端激酶抑制SP600125干预对AQP3和AQP9的蛋白和基因水平均无明显作用。油酸诱导后，磷酸化丝／苏氨酸蛋白激酶蛋白相对表达水平从0．21±0．02下降到0．13士0．03，磷酸化p38蛋白相对表达水平从0．58±0．06升高到1．02±0．10，差异均有统计学意义(f值分

5、别为3．8431和12．5289，P<0．01或尸<0．05)。结论油酸通过激活p38MAPK信号通路下调AQP3的表达，而通过抑制磷脂酰肌醇一3激酶／丝氨酸苏氨酸蛋白激酶途径并激活p38MAPK途径刺激AQP9表达升高。【关键词】7Jcl~'m通道蛋白质类；1一磷脂酰肌醇-3激酶；p38丝裂原活化蛋白激酶类；脂肪肝，非酒精陛Expre~nofaquaporin3andaquaporin9isregulatedbyoleicacidthroughthePI3K／Aktandp38MAPK$igna~pathwaysGULu-yun*QI

6、ULie-wang,CHENXiao-feng,LULin,MEIZhe-chuan．*DepartmentofDigestiveDiseases,theSecondAfiliatedHospitalofChongqingMedicalUniversRy,Chongqing40001~ChinaCorrespondingauthor：MEIZhe-chuan,Email：Meizhechuan@21cn．eomrad．】ObjectiveTostudytheefectofoleicacid(oA)onexpressionofaquagl

7、yceroporingenes，AQP3andAQP9，inhepatocytesteatosisandtoinvestigatetheunderlyingmolecularmechanismsusinganinvitrosystem．MethodsHepG2cellsweretreatedwithOAatdiferentconcentrationtoestablishinvitroDOI：10．3760／cma．j．issn．1007-3418．2013．10．008作者单位：400010重庆医科大学附属第二医院消化内科(顾陆昀、陈小

8、风、吕琳、梅浙川)；重庆医科大学附属永川医院消化内科(邱烈旺)顾陆昀女，26岁，硕士研究生。通信作者：梅浙川，Email：Meizhechuan~121cn．com·754·中华肝脏病杂志2013年l0月第