白花丹参水提取液灌洗治疗大鼠慢性骨髓炎的实验分析

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1、摘要长细胞，在含15％胎牛血清1640培养液中加入GM．CSF、IL．4和SCF，培养诱生人脐血树突状细胞(HumanUmbilicusblooddendriticcell，HUBDC)。取对数生长期的BGC823肿瘤细胞，用反复冻融法取得肿瘤细胞提取物作为肿瘤抗原，负载HUBDCs，促使HUBDCs成熟。于普通光学显微镜下观察HE染色后的HUBDCs形态，并用流式细胞仪对其进行表型鉴定。将HUBDCs中的非贴壁细胞采用尼龙毛柱法分离出T细胞并鉴定其纯度。观测负载抗原成熟的HUBDCs对T细胞的活化增殖能力(混合淋巴细胞反应)。采用MTT比色法检测活化的T细胞对BG

2、C823靶细胞的杀伤。动物实验部分，首先建立荷瘤动物模型，将BGC823细胞注射于裸鼠并观察成瘤情况，记录肿瘤大小。将荷瘤裸鼠随机分成四组，治疗方案如下：A组：体外负载抗原的HUBDCs和未激活T细胞；B组：体外经HUBDCs诱导活化的特异性T细胞(CTL)；C组：负载BGC823抗原的HUBDCs；D组：未经HUBDCs致敏的新分离T细胞。观察裸鼠体内肿瘤的生长情况并分别记录。幺上甲耋口木用细胞因子GM．CSF、SCF和IL．4配伍能诱导人脐血贴壁单个核细胞向DC分化，加入肿瘤抗原提取物能促使HUBDCs成熟，HE染色光镜下观察HUBDCs形念符合典型毛刺状、树枝

3、状DCs形态，流式分析仪检测细胞表型：MHC—I、MHC．II、CD86(协同刺激分子)、CD54(黏附分子)、CDllc均较诱导前有显著升高。其中，CD86表达率为40．5996±3．27％，CD54为59．21％±6．32％，CDlle表达率为67．01％±5．17％，MHC．I和MHC．11分别为：42．3796±10．1l％和56．31％±6．76％，与诱导前相比，差异具有统计学意义P<0．01。同种混合淋巴细胞反应显示：HUBDCs体外可以使抗原特异性T细胞活化增殖为效应T细胞(cytotoxicTlymphocytes，CTL)，且CTL对靶细胞BGC8

4、23可以产生特异性的抑制及杀伤。在动物实验中，成功建立人胃癌BGC823荷瘤裸鼠模型。按实验方案分别对各组治疗后，注射负载抗原HUBDCs+新分离T细胞的A组和注射特异性CTL的B组都有明显抑瘤效应，至30天时A组肿瘤大小为：21lmm3B组为：153mm3，B组抑瘤效应更加显著；C组单独注射负载抗原的HUBDCs，D组注射未致敏新分离的T细胞均无明显抑瘤效果，至30天时C组，D组肿瘤大小分别为：1093mill3和1022舢3。C组D组肿瘤细胞仍快速生长。II摘要结论1)利用细胞因子能从人脐血单个核细胞(HUBMC)中诱导出具有典型形态、表型和具有活化T细胞功能的

5、HUBDCs：2)成熟人脐血DC与T细胞共同移植，能显著增强荷瘤裸鼠的抗肿瘤能力。关键词：脐血，树突状细胞，裸鼠，肿瘤

6、IICTLinducedfromhumanumbilicusblooddendriticcellinhibitBGC823tumorcellsMastercandidate：ZhengCaoSupervisorProf．"YingDuDongchunQinDepartmentofMicrobiologyandImmunology，BasicMedicalCollege，ZhengzhouUniversity，Zhengzhou，Henan45000

7、1BackgroundandobjectAbstractInrecentyears，withthepopulationagingandenvironmentaldeterioration,theincidenceandmortalityofmalignanttumorcontinuetoshowanupwardtendency·Inclinicalpractice，surgery,radiotherapyandchemotherapyisthetraditionalmethodoftreatmentofcancer．However，thesemethodsaredi

8、fficulttoeliminatesmallf-0cusesinsidethebody,andmoreover,causegreatdamagetohumanbody．Themalignanttumorwaswipedout，attheexpenseofthenormaltissuesandcellsofourbodVweredamaged．WithfurtherunderstandingofthemechanismoftuITIOranddevelopingofoncomolecularbiologyandbiotechnology，cancerbiothe