甲氧基欧芹酚纳米制剂与氟康唑协同抗耐药真菌作用

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1、第二军医大学博士学位论文甲氧基欧芹酚纳米制剂与氟康唑协同抗耐药真菌作用姓名：李林鹏申请学位级别：博士专业：药理学指导教师：姜远英201205甲氧基欧芹酚纳米制剂与氟康唑协同抗耐药真菌作用摘要目的：本课题旨在通过研究甲氧基欧芹酚与氟康唑的相互作用，寻找能够对抗耐药白念珠菌安全有效的联合用药方案，为抗真菌药物研究，尤其是水溶性差、口服生物利用度不高的抗真菌药物研究提供新思路。方法：1．经棋盘式微量稀释实验研究甲氧基欧芹酚(Ost)与氟康唑(FLC)的协同抗耐药白念珠菌作用，并以体外琼脂平板扩散实验验证两药协同作用。2．建立甲氧基欧芹酚HPLC体外分

2、析方法，研究药物的溶解度、油水分配系数等基本理化性质。3．绘制标准曲线，并对回收率，精密度，专属性进行考察。4．以高分子聚合材料丙烯酸树脂EudragitS100作为载体材料，以泊洛沙姆P188为乳化剂，采用乳化溶剂扩散法制备了纳米粒(Ost。S100．NP)。5．以纳米粒的平均粒径、分布、包封率及载药量为指标，采用正交设计综合评价法优化处方组成及工艺；6．透射电镜观察了纳米粒子的表面形态并测定了平均粒径与粒度分布。7．粉末X．射线衍射法和差示热量扫描法对Ost．S100．NP进行鉴别；低温超速离心法分离纳米粒，高效液相色谱法测定包封率。8．恒

3、温振荡法对纳米粒的在不同pH介质中的体外释药进行研究；用动态透析法研究其体外释药特性。9．以0st溶液为参比制剂，将纳米粒对大鼠灌胃，研究其口服药代动力学。lO．通过系统性真菌感染小鼠体内实验进一步验证Ost与氟康唑合用的抗真菌作用。结果：1．棋盘式微量稀释实验发现单用氟康唑耐药的菌株，合用甲氧基欧芹酚后，菌株对氟康唑的敏感性增强，合用后氟康唑的平均MIC80为2．82¨g／ml，同时甲氧基欧芹酚的平均MIC80降到4．73¨g／ml，平均协同指数为0．135。体外琼脂平板扩散实验验证了以上结果，与任何一种药物的单用效果相比，合用药片的抑菌圈明

4、显扩大，边界清晰，抑菌圈内没有菌落生长。而在无法抑制耐药菌生长的64ug／ml氟康唑的琼脂平板上，甲氧基欧芹酚药片周围显现出明显的抑菌圈。2．确定甲氧基欧芹酚的体外HPLC分析条件为：ODSC18(4．6mm×250mm，5um)色谱柱；流动相为乙腈一水(60：40)；流速为1．OmL／min；检测波长为321nm；柱温为250C；进样量为20pL。3．以峰面积(y)对浓度(x)作回归，得到线性方程为：y=68988x．11763，R=O．9997。线性范围：1．027—90．080¨g／mL，甲氧基欧芹酚量与色谱峰面积积分值呈良好的线性关系。

5、甲氧基欧芹酚峰的保留时间为7．6min左右，而空白纳米粒在相应位置无吸收峰出现，即载体材料和辅料不影响药物的测定。4．以纳米粒的平均粒径、分布、包封率及载药量为指标，采用J下交设计优化处方组成为P188125mg；蒸馏水125mL；Ost50mg；EudragitS100200mg；油水比2：5；温度30”C；搅第二军医大学博士学位论文拌速度400r／min。5．所得Ost．S100．NP平均粒径为55．4士2．1nm；PDI(0．065士0．005)；包封率为(98．99土0．1)％；载药量(23．85士0．2)％；回收率为(98．5士0．1

6、)％；综合评分O．362。6．以最佳工艺处方所制备的甲氧基欧芹酚纳米粒粒径分布为单峰分布，粒径分布范围为25．120nm，平均粒径为55．47nm。0st．S100．NP在电镜下为均匀规则的圆球形，没有粘连的现象。7．XRD分析表明三者之间发生了较强的相互作用，结晶形态发生改变，形成了纳米粒。DSC分析提示生成了新的物相，纳米粒形成，与XRD分析结果一致。8．与Ost对照，Ost．S100．NP的体外释药具有显著的pH依赖性。随着pH值的升高，药物释放百分率逐渐增大，当pH三6．O时，释药量均>80％。Ost．S100．NP在pH6．8的磷酸盐

7、缓冲液中能够完全释放。9．相比溶液，0st．S100．NP能明显提高Ost的血药浓度，延长达峰时间，降低药物的血浆清除率，减缓药物的消除，提高其生物利用度，相对生物利用度为168％。lO．氟康唑合用甲氧基欧芹酚后能显著提高系统性真菌感染小鼠的存活率，疗效显著增强，二者呈现明显的协同作用。与Ost溶液相比，相同剂量的Ost．SlOO．NP合用氟康唑能更好的观察到两药的协同作用，效果更为明显。结论：我们的研究证明，甲氧基欧芹酚合用氟康唑对耐药白念珠菌不但体外有很强的协同作用，而且在系统性耐氟康唑白念珠菌感染的小鼠也能起到很好的治疗，纳米粒制剂能明显

8、改善甲氧基欧芹酚极低的生物利用度，使体内作用更为明显，这也使其有望应用于临床治疗深部耐药真菌感染。关键词：白念珠菌，耐药性，氟康唑，甲氧基欧芹酚，协同