醇溶蛋白电泳和田间种植鉴定油菜杂交种纯度相关性探究

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1、醇溶蛋白电泳和田间种植鉴定油菜杂交种纯度相关性探究摘要纯度检测是油菜杂交种种子质量控制的最重要环节之一。采用醇溶蛋白电泳与田间种植法对48份油菜杂交种样品进行纯度检测，并对2种方法所得数据进行了回归分析。结果表明：2种纯度鉴定方法所得结果相关性达极显著水平，相关系数r=0.927**,线性回归方程为：y=16.211+0.842x,表明利用醇溶蛋白电泳技术鉴定油菜杂交种纯度是可靠的。该研究在生产中可用醇溶蛋白电泳纯度推算出田间纯度。关键词油菜；醇溶蛋白电泳；田间种植；纯度鉴定中图分类号S565.4；S339.3+1文献标识码A文章编号100

2、7-5739(2013)16-0017-02Pol-CMS是我国目前油菜应用最广泛的杂交制种系统，但该系统的不育系对温度敏感，易出现低温自交结实现象[1],从而导致杂交种子纯度质量下降，严重时会给生产带来严重损失，因此在油菜杂交种销售前，必须进行严格的种子纯度质量检测。我国油菜杂交种的纯度鉴定目前主要采用最直观的田间种植法，但该方法对鉴定人员的经验依赖性较高，鉴定结果不稳定，且鉴定周期长，尤其难以适应当年供种的生产需求。新兴的分子标记技术以其高度的准确性和稳定性表现已被广泛认可，如SSR、AFLP、RAPD等均已开始被应用于作物种子质量检测

3、［2-7］,特别是SSR标记技术已经被纳入水稻、玉米等作物的种子纯度鉴定的行业标准。但总体而言，分子标记技术所需成本相对较高，技术要求相对严格，很难普及到一般的种子企业。种子贮藏蛋白质和同工酶电泳具有技术简便、鉴定快速、所需成本低廉等优点,已被广泛应用于禾本科作物的种子纯度鉴定工作，如酯酶同工酶、谷蛋白、清蛋白、醇溶蛋白等生化电泳技术已作为一种重要的种子纯度鉴定技术应用于生产。在油菜种子纯度鉴定中，醇溶蛋白电泳技术［8］直接以种子为分析对象，不需要发芽培养，鉴定效率高、成本低廉，有望作为一种有效的种子纯度鉴定方法得以普及。然而，该方法与其他

4、室内纯度鉴定方法一样，鉴定结果与田间种植鉴定结果之间存在一定差异，但是目前尚没有关于该2种方法的对比研究报道。该研究以长江中、下游推广面积较大的4个国审油菜杂交品种的48份制种样品为研究对象，分别利用种子醇溶蛋白电泳技术和田间种植鉴定2种方法分析其纯度，并通过统计学分析，探讨醇溶蛋白电泳鉴定结果和田间种植鉴定结果的相关性，以期为醇溶蛋白电泳鉴定技术用于油菜杂交种种子纯度质量监控提供理论依据。1材料与方法1.1供试材料供试材料为丰油701、湘杂油2号、洼油5103、洼油5204个国审油菜杂交品种，其中每个品种12份杂交制种样品，每份样品随机取

5、160粒种子用于种子醇溶蛋白电泳分析,400粒种子用于田间种植鉴定。1.2试验方法1.2.1醇溶蛋白电泳分析。参照陈卫江等报道的方法进行样品种子的醇溶蛋白电泳分析［8］。醇溶蛋白电泳纯度（%）=（供检种子粒数-母本带型粒数）/供检种子粒数XIOOo1.2.2田间种植鉴定。供试样品的鉴定小区采用随机排列，每小区9行，行长2.0m,行距0.5m,每行均匀播种40〜50粒种子，全生育期不间苗，在初花期至盛花期根据植株的育性表现调查纯度，种植纯度（％）=（供检株数-不育株数）/供检株数XIOOo2结果与分析2.1醇溶蛋白电泳与田间种植鉴定结果对比从

6、表1可以看出，2种纯度鉴定方法的鉴定结果存在差异。48份样品中有40份样品醇溶蛋白电泳鉴定结果低于田间种植鉴定，占83.3%o48个供试样品鉴定结果的差值在0.1%〜7.3%,其中36个样品的鉴定结果差值小于5.0%,12个样品鉴定结果差值在5.0%〜7.3%o利用统计学软件SPSS10.0进行对比分析，结果表明醇溶蛋白电泳法的纯度鉴定结果与田间种植鉴定存在极显著差异。2.22种方法鉴定结果的相关性分析利用统计学软件SPSS10.0对上述结果进行统计学分析，得到回归方程为y=16.211+0.842x,其中y代表田间种植鉴定纯度，x代表醇溶

7、蛋白电泳鉴定纯度，相关系数为r=0.927**o对回归方程进行显著性检验，从表2可以看出,F值呈显著性差异；对相关系数进行显著性检验，结果表明,2种纯度鉴定方法的结果相关性达极显著水平，表明醇溶蛋白电泳鉴定和田间种植鉴定的纯度结果有着极显著的线性相关关系，可以根据醇溶蛋白电泳的鉴定结果推算田间种植鉴定的纯度值。3结论与讨论统计学回归分析得到的回归方程、相关系数均达到极显著水平，证明醇溶蛋白电泳和田间种植鉴定的结果存在极显著的线性关系，说明利用醇溶蛋白电泳鉴定杂交油菜种子纯度是可行的，结果是可靠的。此外，该方法具有简单、廉价、效率高等优点，在

8、8h之内就可以得到检测结果，可以为科研单位和种子企业的种子生产进行实时监控，确保大田生产用种的安全。该研究中，83.3%的供试样品的醇溶蛋白电泳鉴定结果低于田间种植鉴定，这种现象