阻塞性黄疸患者肝细胞中bcl-2基因的表达及意义

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1、阻塞性黄疸患者肝细胞中bcl-2基因的表达及意义赖智德林坦王仪王耀东陈新（福建医科大学附属省立临床学院即福建省立医院肝胆外科福建福州350001）【摘要】目的探讨阻塞性黄疸患者肝细胞凋亡及bcl・2基因表达情况。方法应用原位DNA末端标记法检测肝细胞凋亡指数，免疫组织化学方法检测be1・2基因表达情况。结果阻塞性黄疸患者肝细胞凋亡指数及bcl-2基因表达均明显高于无黄疸者。黄疸较轻时，bcl・2基因大量表达，凋亡指数就较低。随着黄疸加深，肝细胞的bcl・2基因表达减弱，凋亡指数就升高。结论肝细胞凋亡存在于阻塞性黄疸患者肝脏中，阻塞性黄疸患者肝细胞有bcl-2基因表达，bcl・2基因对肝细

2、胞凋亡有抑制作用。【关键词】阻塞性黄疸细胞凋亡肝脏bcl-2【中图分类号1R392.12【文献标识码】A【文章编号12095-1752（2012）03-0056-02阻塞性黄疸是外科的常见病症，肝脏是最先受损且损伤最重的器官，其损害机制尚未完全阐明。近年来细胞凋亡与肝脏疾病的关系逐渐得到重视,bcl-2基因是目前最受关注的与细胞凋亡相关的基因之一。木研究旨在通过研究bcl・2基因在阻塞性黄疸患者肝细胞凋亡中的表达，以探讨其在阻塞性黄疸患者肝细胞凋亡中的作用。1材料与方法1.1病例选择：硏究组：选择需手术治疗的阻塞性黄疸患者30例，年龄32・76岁,平均46.6岁,其中良性阻塞：胆总管结石

3、15例;恶性阻塞：肝外胆管癌或胰头癌无肝转移患者15例。对照组：需开腹手术的无黄疸患者15例。剔除以下患者：病毒性肝炎，药物性肝损害，肝硬化。1.2检测患者血清胆红素及肝功能指标（应用美国贝克曼全自动牛化仪）。1.3术中切取小块肝组织检测肝细胞凋亡指数及相关基因BCL-2的表达:1.3.1肝细胞凋亡应用原位DNA末端标记法检测：采用德国宝灵曼公司的TUNEL试剂盒，显微镜下观察细胞核染成棕黄色为阳性细胞，即凋亡细胞。每例切片计数5个400倍视野，以平均每100个细胞中含凋亡细胞个数作为凋亡指数(Al)o1.3.2BCL-2的表达检测采用免疫组化方法：BCL-2单克隆抗体购买自武汉博士德公

4、司，结果以细胞浆出现棕黄色颗粒为阳性细胞，切片内无阳性细胞为阴性(一)表达，阳性细胞率小于1/3为(+)表达，阳性细胞率1/3〜2/3为(++)表达，阳性细胞率大于2/3为(+++)表达。1.3.3数据处理：采用SPSS统计软件包进行分析.计量数据以均数±标准差(X±S)表示,两组间数据比较采用t检验和X2检验,以P<0.05为有显著性差异。2结果2.1黄疸组与对照组肝细胞凋亡指数(Al),bc1-2基因表达检测结果：(见表1.)黄疸组凋亡指数(AI)及be1-2基因表达均明显高于对照组，两组间差异有显著性意义(P<0.01)o表1黄疸组与对照组凋亡指数(Al

5、),bcl-2基因表达情况2.2黄疸的严垂程度与凋亡指数、Bcl・2基因表达的关系：黄疸的严重程度分级：血胆红素V85.5mmo1/1为轻度,85.5〜171mmo1/1为中度，>171mmol/l为重度.黃疸的严重程度与凋亡指数(Al),Bcl・2基因表达的关系见表2。表2黄疸的严垂程度与凋亡指数(Al),Bel-2基因表达的关系Bel-2基因表达于肝细胞的胞浆中，呈棕黄色颗粒，胞核不着色.Krusal-Willis检验显示:黄疸程度不同的各组之间肝细胞Bcl・2蛋白的表达差异有显著性(P<0.05),对各组进行Mann-Whitney检验显示：黄疸程度不同的各组两两之间Bel-

6、2的表达均有显著性差异，即轻度与中度黄疸、重度黄疸肝细胞Bel-2的表达差异有极显著性(P<0.01),中度与重度黄疸肝细胞Bel-2的表达差异亦有显著性(P<0.05),随着黃疸深度加深，凋亡指数升高，肝细胞Bcl-2蛋白的表达减弱，各组之间的差异有显著性意义。3讨论阻塞性黄疸是临床常见病，其直接结果是肝内胆汁淤积，造成肝细胞损伤。研究表明⑴淤胆吋肝细胞坏死并不多见，淤胆时肝脏常见的病理形态改变为出现萎缩变小的肝细胞和嗜酸性小体，这些形态特征符合细胞凋亡的表现。阻塞性黄疸时肝功能损害的机制很可能是由于淤胆的胆盐促进肝细胞凋亡所致，王剑明的动物试验证实了胆盐可致肝细胞的凋亡［

7、2］。Bcl・2基因是目前最受关注的与细胞凋亡相关的基因之一。它最早是从B细胞淋巴瘤染色体14和18异位断裂点t(14:18)中将bcl-2基因分离出来的。Bcl・2基因蛋白表达产物定位于线粒体，核膜和内质网，在其氨基酸C■末端有一由19个氨基酸组成的疏水性片段，并借此与膜相连。通过转基因动物和基因转染实验研究发现，bcl・2对细胞凋亡具有明显的抑制作用［3］o在本实验中，阻塞性黃疸患者肝细胞的凋亡指数及bcl-2基因的阳性表达均明