selex技术筛选甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌适配子

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1、广州医学院硕士学位论文广州医学院硕士研究生学位论文SELEX技术筛选甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌适配子ScreeningaptamersofmethicillinresistantstaphylococcusaureusbySELEX专业名称：药理学研究方向：细菌分子靶点筛选学位申请人：毛伟丽导师：严鹏科主任药师广州医学院·广州二O一二年五月广州医学院硕士学位论文目录中英文词汇对照表……………………………………………………………………1中文摘要………………………………………………………………………………2英文摘要………………………………………………………………………………4

2、前言……………………………………………………………………………………6实验技术路线………………………………………………………………··………10一、材料和方法………………………………………………………………………11二、结果………………………………………………………………………………21讨论……………………………………………………………………………··……36结论………………………………………………………………………··…………40参考文献…………………………………………………………………………··…41综述………………………………………………………………………………··

3、…45致谢………………………………………………………………………………··…52原创申明…………………………………………………………………………··…53广州医学院硕士学位论文中英文词汇对照表英文缩写英文全称中文名称SELEXsystemevolutionofligandsby指数富集的配基系统进化exponentialenrichmentssDNAsingle-strandedDNA单链脱氧核糖核酸dsDNAdouble-strandedDNA双链脱氧核糖核酸bpbasepair碱基对dNTPdeoxynudeosidetriphosphate脱氧三磷酸核苷酸FITCf

4、luoresceinisothiocyanate异硫氰酸酯荧光素PCRpolymerasechainreaction聚合酶链反应IPTGisopropyl-β-D-thiogalactopyranoside异丙基-β-D-硫代半乳糖X-gal5-bromide-4-chloro-3-indio-β-D-5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳Galactoside糖苷Tristris(hydroxymethyl)aminomethane三羟甲基氨基甲烷rpmrevolutionsperminute每分钟转数LBLurib-BertanimediumLB培养基PAGEpoly

5、acrylamidegeleletrophroresis聚丙烯酰胺凝凝胶电泳EBethidiumbromide溴化乙啶TEMEDN´,N´,N´,N´,-tetramrthylenediamineN´,N´,N´,N´,-四甲基乙二胺四甲基联苯胺PBSPhosphate-bufferedsaline磷酸盐缓冲液MRSAmethicillinresistantstaphylococcus甲氧西林耐药金黄色葡萄aureus球菌MSSAmethicillinsensitivestaphylococcus甲氧西林敏感金黄色葡萄aureus球菌MRSCNmethicillinres

6、istantcoagulasenegative甲氧西林耐药凝固酶阴性staphylococcus葡萄球菌MSSCNmethicillinsensitivecoagulasenegative甲氧西林敏感凝固酶阴性staphylococcus葡萄球菌1广州医学院硕士学位论文SELEX技术筛选甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌适配子硕士研究生:毛伟丽导师:严鹏科摘要目的：利用SELEX技术筛选与甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)特异性结合的寡核苷酸适配子，为建立MRSA快速诊断的新方法提供实验依据。方法：甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌（MRSA）为临床分离株，甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌

7、（MSSA），为国家标准品菌株；体外合成一个含35个核苷酸随机序15-16列总长81nt库容量大约为10的ssDNA文库；优化PCR反应条件；用生物素标记的引物扩增dsDNA，生物素链霉亲和素磁珠分离方法构建ssDNA文库；ssDNA文库先与MSSA结合，反筛除去与其结合的ssDNA，然后与MRSA结合，洗脱与其结合的ssDNA，构建次级ssDNA文库进行下一次筛选。利用PCR技术扩增每轮反筛，正筛后的ssDNA文库，PCR产物进行2%琼脂糖凝胶电泳，观察每轮筛选结果。将最后一轮筛选后得到的ssDNA用测序引物进行PCR扩增，