多重耐药耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药与致病基因的研究

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。研究生签名：弛导师签名≯弘矗乡；学院领导签名：矽。吕年厂月z6日研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含

2、其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：觚导师签名：／乞产彬珈穹年j-,El26Et中文摘要多重耐药耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药及致病基因研究摘要目的：了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)对抗菌药物的耐药情况及其耐药机制，为临床上合理应用抗菌素提供依据。方法：收集2005年9月’2006年12月分离自河北医科大学第一医院临床患者的MRSA45株，采用头孢西丁纸片法和苯唑西林微量肉汤法鉴定为MRSA；采用Kerby．Bauer纸片扩散法测定细菌对17种抗生素的敏感性；采用聚合酶链式

3、反应(PCR)对45株MRSA的13一内酰胺类抗菌药物耐药基因mecA、四环素类抗菌药物耐药基因tetM、大环内酯类抗菌药物耐药基因ermA／B／C、氨基糖苷类抗菌药物耐药基因aac(6、)／aph(2一)和aph(3、)一III和杀白细胞毒素(PVL)基因进行检测和研究；选取PVL基因阳性的15号菌株进行DNA序列分析；并采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对PVL基因阳性的12株MRSA进行同源性分析。结果：1标本的类型和来源：45株MRSA分离自痰液、伤口分泌物等7种临床标本，其中痰标本和伤口分泌物各17例，所占比例均为37．8％；标本分别来源

4、于呼吸科、烧伤科、普外科等10个临床科室。其中呼吸科13例，所占比例最大为28．9％。2药物敏感试验结果：45株MRSA对万古霉素敏感率达100％；对替考拉宁、氯霉素的敏感率分别为91．1％和75．6％；对青霉素G、红霉素、阿齐霉素、头孢唑啉、克中文摘要林霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、四环素和庆大霉素的耐药率分别为100％、91．1％、86．7％、84．4％、82．2％、80％、77．8％、71．1％和51．1％。3各种耐药基因的检出情况：45株MRSA中耐药基因mecA、tetM、ermA／B／C、aac(6、)／aph(2“)和aph(3、’

5、)一III的阳性率分别为100％、57．8％、73．3％、51．1％、22．2％；有12株检出杀白细胞毒素(PVL)基因，占总菌株的26．7％。4不同来源科室的各种基因检测结果：来源于呼吸科的MRSA的耐药基因mecA、tetM、ermA]B／C、aac(6、)／aph(2”)、aph(3、)．III和PVL基因阳性菌株数占总阳性菌株的百分率分别为28．9％(13／45)、34．6％(9／26)、30．3％(10／33)、30．4％(7／23)、20％(2／10)、8．3％(1／12)；来源于烧伤科的MRSA的耐药基因mecA、tetM、erm

6、A／B／C、aac(6、)／aph(2一)、aph(3、)．III和PVL基因阳性菌株数占总阳性菌株的百分率分别为17．8％(8／45)、23．1％(6／26)、21．2％(7／33)、21．7％(5／23)、50％(5／lO)、25％(3／12)。我院呼吸科和烧伤科的MRSA中各种耐药基因检出率较高。5PVL基因阳性菌株测序结果：对15号PVL基因阳性菌株经双向测序，所得基因序列与Genbank中登陆的PVL基因序列比较，经DNASTAR软件分析，与AB295473．1序列100％一致。612株PVL基因阳性的MRSA经PFGE电泳的同源性分

7、析结果：12株PVL基因阳性MRSA的PFGE图谱分为A、B2个型，其中A1型8株，A2型1株，B型3株，A型为主要流行株；各型菌株在烧伤科、普外科、皮肤科、肾内科间有流行，主要流行菌株可在各病区之间传播。结论：1MRSA呈多重耐药：在河北医科大学第一医院分离的MRSA对B一内酰胺类、四环素类、氨基糖苷类、2中文摘要大环内酯类、氟喹诺酮类抗菌素呈多重耐药，对青霉素G、红霉素、克林霉素、环丙沙星、四环素的耐药率均在70％以上；除了对万古霉素敏感率达100％P[-，对替考拉宁、氯霉素的敏感率也较高。万古霉素可作为MRSA感染的首选。2临床分离的多重

8、耐药MRSA中耐药基因mecA、tetM、ermA／B／C、aac(6、)／aph(2一)、aph(3、)．III检出率较高，表明耐药基因的存在是MR