门静脉高压症脾功能亢进患者脾脏和外周血cd4+cd25+cf127low-调节性t细胞表达变化及意义

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1、温州医学院硕士学位论文门静脉高压症脾功能亢进患者脾脏和外周血CD4+CD25+CF127low/-调节性T细胞表达变化及意义姓名：王金华申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：张启瑜2012-05-24温州医学院硕士学位论文门静脉高压症脾功能亢进患者脾脏和外周血CD4+CD25+CDl271耐调节性T细胞表达变化及意义中文摘要目的：探讨CD4+CD25+CDl271。舭调节性T细胞(Treg)在门静脉高压症(portalhypertension，PHT)脾亢患者脾脏组织及外周血中的表达变化及其临床意义。方法：PHT脾亢患者29例(脾亢组)，健康成人14例(

2、对照组)，采用流式细胞术检测外周血及脾脏CD4+CD25+CDl2710w／-Treg的表达情况。将新鲜的脾脏组织冲洗干净，取一小块组织(约10mm3)，用Medimachine系统制备单细胞混悬液，并用PBS稀释至0．5万个／此。每例标本取两个试管，分别加入CD4-FITC／mouseIgGlPE，CD4．FITC／CD25．PE／CDl27．AlexaFluor@647各10I．tL：每管再加入PBS稀释后的混悬液601xL后混匀避光孵育25min；jJl：l2mLl×LysingBuffer，混匀避光孵育15min；溶血后PBS洗2次，最后加200斗

3、L含1％多聚甲醛PBS重悬并流式细胞仪上机检测。外周血的检测每管加100J_tL抗凝全血，步骤如上述。结果：脾亢组外周血及脾脏组织CD4+CD25+CDl271。州‘Treg占CD4+T细胞的比例分别为(10．20+1．63)％和(12．73±1．71)％，明显高于对照组的(6．84±1．45)％和(10．23±1．25)％(尸

4、eg的表达随肝功能Child-Pugh分级的加重而升高，与肝功能Child．Pugh分级呈正相关(r=O．656、4温州医学院硕士学位论文r=0．862，P=0．000)，而与年龄、性别、上消化道出血次数、食道胃底静脉曲张程度无关。结论：PHT脾亢患者脾脏和外周血CD4+CD25+CDl2710w／-Treg表达均上调，可能是导致脾脏免疫功能低下的原因之一；CD4+CD25+CDl27low／-Treg的表达与肝功能Child-Pu．gh分级结果可能有助于患者脾脏免疫功能的评估。关键词：门静脉高压症；脾亢；CD4+CD25十CDl27t。w／‘调节性T细胞

5、；免疫功能温州医学院硕士学位论文TheExpressionandSignificanceofCD4+CD25+CDl271耐RegulatoryTcellsinthespleenandperipheralbloodofpatientswithportalhypertensionandhypersplenismAbstractObjectiveToinvestigatethechangeofexpressionofCD4+CD25十CD12710们regulatoryTcellsinthespleenandperipheralbloodofpatientsw

6、ithportalhypertension(PHT)andhypersplenismandthesignificanceofthischange．MethodsTheratiosofCD4+CD25+CD12710、卅‘Treginperipheralvenousbloodandspleenwereexamined、析tllflowcytometryin29patientswithPHTandhypersplenism，andcomparedwitll14healthyindividuals．Freshspleenorganizationisrinsedc

7、lean，thentakeasmallpieceoforganization(about10mm3)．UsingPBSdilutethesinglecellsuspensionfluid，whichWaSmadebytheMedimachineSystem，to5thousands／IxL．Eachsampletakentwotesttubes，addingCD4-FITC／mouseIgG1PEandCD4-FITC／CD25-PE／CD127一AlexaFluor@647of10ktLseparately,eachtubethenadd60J_tLdi

8、lutedsinglecellsuspensionfluid，vo