蝴蝶兰属lst-ssr标记开发及其在兰属上的转移性

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1、安徽农业大学硕士学位论文蝴蝶兰属LST--SSR标记开发及其在兰属上的转移性姓名：陈程申请学位级别：硕士专业：园林植物与观赏园艺指导教师：汪天；张水明201206摘要蝴蝶兰是兰科(Orcllidaceae)蝴蝶兰属(肼别沈加芦西Bl姗e)植物，具有很高的观赏价值和经济价值。利用NCBI上提供的8188条蝴蝶兰EST序列开发EST-SSR引物，用来分析市场上较常见的16个蝴蝶兰栽培品种的遗传多样性，了解其遗传多样性和亲缘关系，为今后的育种提供参考依据；进一步将开发的蝴蝶兰EST-SSR引物应用于兰属植物上。本研究结果如下：1．利用SS砒T软件对NCBI上蝴蝶兰的8188条EST序列按照碱基重复单

2、元数8以上的标准进行SSR位点查找，发掘出246条蝴蝶兰EST中共含有261个SSR位点，检出率为3．19％。二核苷酸重复是最主要的重复类型，占SSR总数的94．25％。SSR的不同重复单元中，最常见的重复单元是：(TA)n和(GA)n，其余出现频率较高的依次为(TC)n、(AT)n和(AG)n。设计了32对EST-SSR引物。2．以蝴蝶兰品种“v31"的DNA为模板进行PCR扩增，发现16对引物能扩增出预期产物。进一步选用这16对引物对16个蝴蝶兰品种进行PCR扩增，发现9对引物有多态性，这9对引物在16个蝴蝶兰品种上共检测出45个等位基因，每对引物可检测等位基因2～12个，平均为5个；SS

3、R引物多态性信息量(川。变化范围为0．527～0．981，平均为0．755；16个蝴蝶兰品种间的遗传相似系数在0．550～O．875之间，平均值为0．728，表明供试品种间的亲缘关系较近。3．L刀?GMA聚类分析结果表明，在遗传相似系数为0．73处可将16个蝴蝶兰品种分为四大类，第1类包括满天红、巨宝红玫瑰等10个品种，第1I类包括夕阳红、富乐夕阳、昌新皇后和新原美人4个品种，第Ⅲ类包括萨拉黄金1个品种，第Ⅳ类包括台湾阿妈1个品种，聚类结果与花色特征比较一致。4．以“春兰1”、“蕙兰l(短茎)”和“墨兰’’这3个国兰品种的基因组DNA为模板进行PCR扩增，共筛选出14对扩增出清晰条带的引物，表

4、明利用蝴蝶兰EST序列开发的SSR标记在兰属上有较好的转移性。关键词：蝴蝶兰EST-SSR遗传多样性转移性Abstract砌口肠P行哪括，a“ndofOrcllidaceae尸厅妇哗括BluInepl锄t，is锄ongthemostrewardiIlgorcllidsto伊ow．NinepolymorpKcprimerpairsweredeVelopedfIrom8188ESTsofP向口肠P甩9陋括￡的mNCBIandusedtoanalysisgeneticdiVersi够of16commonP办口肠P拧9筘括cultivarsontllemarkett0findouttlleirdive

5、rsi够andrelationshipandproVidedreferencefortllefuturebreediIlg．ThedeVelopedprimerpairSwerefhnherappliedtoPcR啪plificationin17O榭6翮“聊cultiVars．Theresultsofth．ss钆dyare弱follows：1．111erewere8188ESTsof尸厅口加刀D筇括舶mNCBlwerescreenedusingSSRjTsoftware，accordingt0tllesta]【ldardofrepeatmotifmⅡnbera．boVeeight．Theres

6、ultssho、Ⅳednlat261SSRsweremined劬m246ESTS诵也a舶quencyof3．19％．DmcleotiderepeatsEST．SSRsweredominant，accountingfor94．25％iIlaUSSRs．(1’A)nand(GA)nweret11emostf-requentmotifS，∞countingfor26．42％and25．61％iIldinucleotiderepeats，f01lowedby(TCn(∽nand(AG)n．TIli啊小voprimerpa：irsweredesigned．2．Sixteenpdmerpairsllade

7、xpectedproductsusiIlg也etemplateofcultiVar‘V3l’．nlesixteenworkableprimerpairswerechosentoPCR锄plificationin16P办口肠P玎印s括cultivarS孤1d45alleleslociweredetectedacross9EST-SSRloci．TheaVeragemlnlberofallelespe