荔枝flowering locust(ft)同源基因的克隆及功能研究

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1、广西大学硕士学位论文荔枝FLOWERINGLOCUST（FT）同源基因的克隆及功能研究姓名：丁峰申请学位级别：硕士专业：果树学指导教师：彭宏祥；何新华201206荔枝FLOWERINGLOCUST(刀)同源基因的克隆及功能研究摘要植物FLOWERINGLOCUST(刀)同源基因在成花过程中起着关键作用，最近FT蛋白已经被证明是开花素。本实验分离克隆了两个荔枝刀同源基因全长序列，分析其生物性息学特性，初步探讨其表达模式，并对其功能进行初步鉴定，为进一步阐明荔枝成花的分子机理提供依据。主要结果如下：1、荔枝刀

2、同源基因克隆及生物信息学分析。利用RT-PCR方法首次获得了荔枝两个刀同源基因cDNA全长，分别命名为LcFTl和LcFT2(基因登录号：JN214350、JN214351o两个基因开放阅读框(ORF)都为522bp，各编码174个氨基酸，其中LEFTl蛋白分子质量为19．65KD，等电点为8．68，LEFT2蛋白分子质量为19．56KD，等电点为7．34。蛋白质二级结构分析显示，LEFTl与LEFT2蛋白都具有4个仪螺旋和10个p折叠区，和其它植物FT蛋白具有相似的结构。同源分析表明，LcFTl和LcF

3、T2核苷酸同源性在不同植物间的一致性为72％．82％。2、荔枝刀同源基因的表达模式分析。利用RT-PCR方法首次得到了荔枝两个Actin同源基因cDNA全长，分别命名为LcActin4和LcActin7(基因登录号：HQ588865、HQ588866)。采用半定量RT-PCR分析表明，在‘三月红’荔枝花芽分化期LcFTl和LcFT2基因只在叶中表达，并且在成熟叶中表达量最多。3、荔枝刀同源基因的功能鉴定。构建植物表达载体35S：：LcFTl和35S：：LcFT2，通过农杆菌介导方法导入‘云烟97’烟草中。

4、结果表明，转LcFTl、LcFT2基因烟草都显著提早开花，转LcFTl基因烟草炼苗移栽16天左右就花芽分化，转LcFT2基因烟草炼苗移栽30天左右花芽分化，而对照野生型需要85天左右花芽才分化，说明LcFTl和LcFT2可能在荔枝成花过程中有重要作用，但这两个基因的功能存在一定的差异。关键词：荔枝；FLOWERINGLOCUST(刀)同源基因；eDNA克隆；表达模式；基因功能TheCloningandFunctionalStudyofFLOWERINGLOCUST(刀)HomologousGenesfro

5、mLitchiDingFeng(CollegeofAgriculture，GuangxiUniversity,Nanning530004，China)AbstractPlantFLOWERINGLOCUST(刀)homologousgeneplaysaimportantroleintheflowerforming．RecentlyFTproteinhasbeenprovedtobeflorigen．Inordertoexplorethemolecularoffloweringorganformingand

6、furtherunderstandingthefloweringmechanismoflitchi，twoFThomologousgeneshavebeenclonedfromlitchiandtheirbioinformaticsmadexpressionpatternanalysiswerestudied．Meanwhile，thefunctionoftwogeneshavebeenpreliminarilyidentifiedinthisstudNmainresultsweresummarizeda

7、sfollows：1．ThecloningandbioinfonnaticsanalysisoflitchiFThomologousgenes．Twofull-lengthcDNAsequencesofFThomologousgeneswerefirstclonedwithRT-PCRfromLitchi，whichwerenamedasLcFTIandLcFT2(GenBankaccessionNo．JN214350、JN214351)．Theopenreadingframe(ORF)ofLcFT!ge

8、neis522bp，encodingaproteinof174aminoacids，丽thestimatedmolecularweightandisoelectricpointof19．65KDand8．68respectively．TheORFofLcFT2geneis522bp，encodingaproteinof174aminoacidstoo，withestimatedmolecularweightandisoelec