胶原蛋白海绵复合骨髓间充质干细胞诱导椎体间融合的实验研究

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1、指导小组成员名单师董有海˝副教授导师组成员黄汉伟˝副主任医师洪洋副主任医师复H大学硕士研究生学位论文目录11^˝1中英文缩写一览表˝2【1】錢￥˝3财鮮˝5IJU丨Y˝7笫?部分兔BMSCs的分离、培左和鉴定˝10材料1？方让˝10实验结束˝12i视˝16结论˝17笫-：部分兔BMSCsQ胶原蛋白海绵支架牛物相容性研究˝19材料1ji;法˝19实验结果˝21vtife˝23辦˝25第三部分BMSCs-皎拟蛋白海绵笈介体屮BMSCs的成竹诱迂及鉴定˝26材料U//?法˝26实验结见˝27Hit˝29会吉˝31第四部分经成骨诱导的BMSCs诱导兔椎体

2、间融合的实验研究˝32材料与方法˝32实验结果˝37iHt˝42˝45全文总结˝46˝47hi己˝57综述一腰椎椎间融合研究进展˝57综述一.BMSCs迮脊柱融合中的研究进展˝66絲˝82硕士期间论文情况˝98Silt˝99复14大学硕士研%生学位论文中英文縮写一览表英文英文缩写中文3-(4.5)-dimethylthiahiazo(-z-yl)MTT3-(4.5):甲基_唑-2.5-：苯基叫氣唑没盐-3.5-di-phenytetrazoliumromideAlbuminfrombovineserumBSA卞血沾n进nAnteriorlumba

3、rinterbodyALIF而路腰桃椎N融介术fusionAxialumbarinterbodyfusionAxiaLIF轴向腰椎椎间融合术BonemesenchymalstemcellsBMSCs骨髓间充质干细胞BonemorphogeneticproteinsBMPs1’]?形态发牛蛋闩ClusterdifferentiationCD丨'

4、细胞分化抗说ComputertomographyCT计兑机断c手1描DimethylsulfoxideDMSO—：屮堪业砜Dulbecco'sMdodiflcationofLG-DMEM低糖培养庙Eagle

5、'sMediumEthylenediaminetraaceticacidEDTA乙二胺四乙酸HematoxylineosinstainingHEstaining苏木精伊纟T.染色Micro-ComputertomographyMicro-CT微型计算机断层扫描PhosphatebufferedsalinePBS磷酸盐缓冲液PosteriorlumbarinterbodyPLIF耵路腰椎椎问融合术fusionTransforaminallumbarTLIF经椎间孔入路腰椎椎间融interbodyfusion合术复a大学硕士研究生学位论文中文摘要胶原

6、蛋白海绵复合BMSCs诱导椎体间融合的实验研究目的①Percoll密度梯度离心法结合贴壁培养法分离、纯化和培养BMSCs,并进行简中.鉴定，以获得高纯度的种子细胞。②评价胶原蛋白海绵与BMSCs的生物相容性。③评价BMSCs-胶原蛋白海绵支架复合休丨：的BMSCs成骨分化能力。④评价BMSCs-胶原蛋ft海绵支架复合体成骨能力及诱导兔腰椎椎体间融合的有效性。方法①从2周龄兔的股骨中抽取脊髓，通过Percoll密度梯度离心让结合贴哦培养法获彳丨丨形态均-的贴壁细胞，通过形态学观察、流式细胞仪表而表型检测和分化滑能研究三方面对细胞进行鉴定。②将P3代

7、BMSCs种植在无菌的胶原蛋白海绵支架上进行共培养，用公式粘附率（％)二(接种细胞数_流失细胞数-未粘附细胞数）/(接种细胞数_流失细胞数）X100%讣算细胞粘附牛：，用MTT比色法观察细胞在支架上的增殖情况并绘制培奶丨11〗线阁，通过相荦显微镜、HE染色及扫描电镜观察支架丨：的细胞怙况及细胞4支架的结合怙况。③将P3代BMSCs-胶原蛋A海绵支架复合体置f成骨i秀导培芥搖小培芥14d，川碱性磷酸酶染色和茜苏红染色法分析细胞的成骨分化情况。④将仙只、体屯为15?4.0kg新西兰大耳白兔随机分为四组(I、II、III和IV)’制备L4/L5椎体间融

8、介实验动物模型，分别是1组为BMSCs-胶原蛋白海绵支架复合体移桢纽，11组为单纯胶原蛋白海绵支架组，III组为0体骨组，IV组为空T]对照组，术后12周处死动物并解剖出整个腰椎，分别用手法触诊、放射学、Micro-CT及组织学的方法评价成骨情况及椎体间融合情况。结果①Percoll密度梯度离心法结合贴苹培养法分离到一种形态为梭形的均一贴壁细胞，流式细胞仪检测P3代细胞表面抗原CD44、CD90、CD105、CD34和CD45阳性率分别为99.34%、98.12%、96.44°/。、2.18%和1.92%,成骨诱导14dC细胞向成骨细胞方向分化。

9、②细胞在支架丨：的平均粘附率为83.13%，细胞能够在胶原蛋白海绵支架上正常增殖，与对照组相比，、丨':台期持续时间史长，细胞数量更多，