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时间:2019-02-17
《纳米脂质体槲皮素对肝损伤大鼠保肝作用的研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、中南大学博士学位论文纳米脂质体槲皮素对肝损伤大鼠保肝作用的研究姓名:张洋申请学位级别:博士专业:外科学指导教师:邓展生20120605博士学位论文中文摘要目的肝脏易发生各种代谢性、感染性疾病以及原发性和继发性肿瘤。我国是肝病高发区,有十分之一多的人口感染肝炎,而乙型肝炎表面抗原阳性患者比阴性者显著增高【11。肝炎导致的原发性肝癌是在我国肿瘤死因中占第二位的常见病。因此研究肝靶向性治疗药物具有重要意义。使用特殊的载体是目前实现肝靶向药物运输的主要方式,而纳米载体可以改变药物的体内分布,显示出体内分布
2、的靶向性。载药纳米颗粒进入人体内迅速被网状内皮系统(RES)摄取,而RES主要分布于肝,因而可借此种被动靶向作用达到肝靶向给药的目的【2】。脂质体(1iposome)是磷脂依靠疏水缔合作用在水中自发形成的一种分子有序组合体,为多层囊泡结构,每层均为类脂双分子膜,层间和脂质体内核为水相,双分子膜为油相。载药脂质体纳米粒具有与细胞结构相似,有生物膜的特性和功能,进入体内被生物降解,免疫原性小、毒性极低;已广泛用于运载水溶性和脂溶性药物DH4】。槲皮素(Quercetin)及其衍生物是自然界分布最广的一
3、种黄酮类化合物,其具有抗癌、抗炎症、抗纤维化、抗氧化和清除自由基、抗病毒、逆转某些肿瘤的耐药性、扩张血管、降低血压的药理活性,并对机体免疫有增强作用;它可对肝癌细胞显出较强的细胞毒作用,能有效抑制肝癌细胞的生长;对肝损伤具有良好的保护作用及一定的抗肝纤维化的作用‘51,在治疗肝脏疾病中有着广阔的应用前景。但由于其博士学位论文中文摘要普通制剂不溶于水,肝靶向性差,直接应用可影响凝血功能【6】,限制了其在肝病治疗中的应用。根据上述思想,以纳米脂质体为药物载体包裹中药成分槲皮素制成纳米脂质体槲皮素,改善
4、给药系统水溶性,实现肝靶向给药,使纳米药物在肝脏中更加聚集。本课题目的是首先制备出水溶性较好的纳米脂质体槲皮素,验证其肝脏靶向性及体内代谢的药效成分,然后应用于肝损伤模型动物考察其对肝脏的保护作用。方法采用高压均质.喷雾干燥法制备纳米脂质体槲皮素,使用透射电镜、粒度仪观察其形态及测量其粒径,HPLC法测量药物包封率。使用CCL4加猪血清配合乙醇饮食建立复合大鼠肝损伤模型,同时建立测定模型大鼠血浆及各组织中槲皮素的HPLC法,肝损伤大鼠分组后分别给予槲皮素和纳米脂质体槲皮素,观察各组模型大鼠体内槲皮
5、素的时间空间分布,并验证其靶向性。给予正常大鼠纳米脂质体槲皮素,使用高效液相色谱.质谱法(LCMS)分析大鼠血浆中的药物代谢产物是否存在药效成分,为药效学研究提供依据。将肝损伤模型大鼠按体重随机分为正常对照组、损伤模型对照组、纳米脂质体槲皮素组、槲皮素药物组,空白纳米脂质体组后按不同剂量给药,比较各组大鼠血清舢.一T、AST、TBiLi、TBA、TP;各组大鼠肝脏系数;各组大鼠肝脏的病理改变;各组大鼠肝脏MDA、GSH.Px、SOD、LN、HA、PCIII、Ⅳ一C。同时通过各组大鼠肝脏Bel.2和
6、Bax蛋白表达的比较,探讨纳米脂质体槲皮素保护肝脏的机制。结果采用本实验方法制得的纳米脂质体槲皮素粒径为II博士学位论文中文摘要1234-3lnm,纳米粒子呈类圆形,表面有厚度均匀的包衣包裹,且粒度分布均匀。为测定槲皮素纳米药物所建立的HPLC法色谱分离良好,精密度、重现性、方法回收率良好。纳米脂质体槲皮素的包封率为91.184-0.78%,载药量为0.614-0.08mg/mg。本实验所建立的复合肝损伤模型大鼠达到实验要求。用于测定血浆及各组织中槲皮素的HPLC法色谱分离及专属性良好,精密度、重
7、现性、方法回收率良好。槲皮素在肝损伤大鼠体内的药物半衰期为10min,而纳米脂质体槲皮素在大鼠体内的药物半衰期达到2h,脂质体延长了槲皮素在大鼠体内的循环时间,纳米脂质体槲皮素具有一定的缓释性。模型大鼠体内槲皮素由注射纳米药物后5min起即可较浓集于肝,以10min后更为明显,且明显高于对照组(氏0.05),槲皮素被制成纳米药物后提高了其对肝脏、脾脏的趋向性,降低了其对心脏、肾脏的趋向性;纳米脂质体槲皮素较槲皮素有很好的肝靶向性。当纳米脂质体槲皮素药物剂量增加到100mg/kg时,大鼠出现死亡。大
8、鼠血浆中槲皮素代谢产物测定的色谱及质谱条件可满足实验需要,使用液相色谱.质谱联用法可确认大鼠血浆代谢产物中含有槲皮素、柽柳素、异鼠李素等药效成分。纳米脂质体槲皮素组及槲皮素组大鼠的一般状况明显优于损伤模型对照组和空白纳米脂质体组,但较正常对照组稍差,同剂量纳米脂质体槲皮素组在血清AST、剐』、TBiLi、TBA、TP、ALB及肝脏MDA、GSH-Px、SOD、LN、HA、PCIII、Ⅳ一C等指标总体较损伤对照组、槲皮素组及空白脂质体纳米药物组有明显的提高。纳米脂质体槲皮素、槲皮素及
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