大蒜素对大鼠肝损伤细胞因子保护作用.doc

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1、大蒜素对大鼠肝损伤细胞因子保护作用【摘要】目的研究大蒜素对高脂饮食致大鼠慢性肝损伤的保护作用及内毒素(Lps)刺激引起肝脏枯否细胞(KCs)分泌细胞因子的变化。方法Wistar大鼠随机分为3组，10周后腹主动脉采血测定血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)、白细胞介素(IL)6、IL(10)、肿瘤坏死因子(TNF)a水平，取肝组织用于组织病理切片的制备。分离培养KCs，检测在Lps刺激下KCs上清液中IL6、IL10、TNFa的水平。结果大鼠发生慢性肝损伤时，血清ALT及IL6、TNFCL水平明显升高(P【关键词】大蒜素大蒜素作为一种来源广泛的含硫化合物，其对四氯化碳、酒精等引起的肝损伤有明

2、显保护作用。研究发现，大蒜素对高脂饮食引起的慢性肝损伤有明显的保护作用，但机制尚未阐明。为此，我们通过复制大鼠慢性肝损伤模型，观察大蒜素对肝脏枯否细胞(KCs)分泌调节的影响。1材料与方法11材料111实验动物Wistar雌性大鼠，体重150〜170g(山西医科大学动物中心)。2主要试剂及药物胆固醇(北京化学试公司)；大蒜素胶囊(湖北金龙药业公司)；IV型胶原酶、胎牛血清培养液(DMEM)、Percoll液、内毒素(Lipopolysaccharide,LpsfromEscherichiacoliOlll：B4）（美国Sigma公司）；白细胞介素（IL）6、IL10、肿瘤坏死因子（T

3、NF）a（解放军总医院科技开发中心放射免疫所）；胎牛血清（杭州四季青生物工程公司）。12方法121动物模型的建立选用雌性Wistar大鼠36只，正常喂养1周后随机分为3组，对照组正常饮食饲养；模型组给予高脂饮食（普通饲料+5%的胆固醇+15%的玉米油）;药物组高脂饮食同时隔日大蒜素（05%,10ml/kg）灌胃。10周后各组取实验动物8只，1%戊巴比妥纳麻醉后腹主动脉采血处死动物，取肝左叶置于10%中性福尔马林固定备做病理切片。122血清指标的检测采集的血液经肝素抗凝后，3000r/min离心15min，分离血浆，用于丙氨酸氨基转移酶（ALT）、IL6、IL10、TNFa水平的检测，

4、按试剂盒说明书进行操作。123枯否细胞的分离、培养及鉴定采用改进Seglen胶原酶两步灌流和Percoll密度梯度离心法分离得到各组大鼠肝脏细胞，经5%C02、37°C恒温培养箱孵育4h，洗去未贴壁细胞。经台盼蓝非特导性酯酶染色，活性和纯度分别达到95%时，调细胞数为5X106,接种于48孔培养板中，每组8孔。124培养上清液细胞因子的检测于培养液中加入100mg/mlLps2滴，4h后收集培养上清，用于IL8、TNFa、IL10的测定。13统计分析计量资料用土s表示，采用SPSS120软件进行方差分析(SNK法)。2结果11慢性肝损伤结果211肝组织病理学变化肝组织病理学显示，模型

5、组与药物组大鼠体肝组织均出现不同程度的弥漫性改变，肝内可见到大量的脂肪空泡(肝小叶内含脂滴细胞/总细胞数＞1/3)及肝细胞气球样变、小叶内和汇管区有大量的以单核细胞、淋巴细胞为主的炎性细胞浸润，但未见明显肝纤维化，表明慢性损伤大鼠发生脂肪肝炎；与模型组相比，药物组大鼠肝组织炎性细胞浸润明显减轻。212血清ALT的变化对照组为(615±126)u/L,而模型组与药物组ALT水平明显升高，分别为(2102±1054),(1441±729)u/L,与对照组比较，P213血清IL6、IL10,TNFa的变化(表1)随着动物发生慢性肝损伤，模型组与药物组IL6、TNFa水平明显升高，IL10则

6、明显下降；药物组IL6水平明显低于模型组，而TNFa降低及IL10升高，差异无统计学意义。表1大蒜素对血浆胞因子的影响注：与对照组比较，aP22枯否细胞的分离、培养结果221KCs形态的改变与对照比较分离KCs结果表明，对照组KCs体积较小，形态相对规整，胞浆突起纤细，胞浆内仅有少量空泡。而模型组KCs体积明显增大，核浆比例增大，胞浆突起明显增多、变粗、胞浆高度空泡化，吴典型的活化状态。222KCs分泌细胞因子的变化（表2）加入Lps后，模型组与药物组培养上清液中IL6、TNFa水平明显高于对照组，IL10、水平发生明显下降。药物组与高脂组比较IL6、TNFa水平显降低，而IL10水

7、平显著升高。表2大蒜素对大鼠KCs培养上清液细胞因子的影响注：与对照组比较，aP3讨论近年来，非酒精性脂肪肝炎发病率明显增高，尽管该病的发生机制尚未完全阐明，但对先天肥胖性ob/ob小鼠和fa/fa大鼠研究表明，KCs分泌功能紊乱参与了疾病的发生。其自然发展成为脂肪肝，特征有胰岛素抵抗、肥胖、脂质代谢紊乱，与人类的非酒精性脂肪肝炎直接相关〔1）。Yang等〔2〕提出肥胖个体枯否细胞功能紊乱可以增加肝细胞对内毒素的敏感性，从而加速脂肪肝炎的形成。对肥胖、瘦素