大蒜素对大鼠肝损伤细胞因子保护作用

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1、大蒜素对大鼠肝损伤细胞因子保护作用【摘要】目的研究大蒜素对高脂饮食致大鼠慢性肝损伤的保护作用及内毒素(Lps)刺激引起肝脏枯否细胞(KCs)分泌细胞因子的变化。方法EM)、Percoll液、内毒素(Lipopolysaccharide,LpsfromEscherichiacoli0111:B4)(美国Sigma公司)；白细胞介素(IL)6、IL10、肿瘤坏死因子(TNF)α(解放军总医院科技开发中心放射免疫所)；胎牛血清(杭州四季青生物工程公司)。　　12方法　　121动物模型的建立选用雌性l

2、/kg)灌胃。10周后各组取实验动物8只，1%戊巴比妥钠麻醉后腹主动脉采血处死动物，取肝左叶置于10%中性福尔马林固定备做病理切片。　　122血清指标的检测采集的血液经肝素抗凝后，3000r/min离心15min，分离血浆，用于丙氨酸氨基转移酶(ALT)、IL6、IL10、TNFα水平的检测，按试剂盒说明书进行操作。　　123枯否细胞的分离、培养及鉴定采用改进Seglen胶原酶两步灌流和Percoll密度梯度离心法分离得到各组大鼠肝脏细胞，经5%CO2、37℃恒温培养箱孵育4h,洗去未贴壁细

3、胞。经台盼蓝非特导性酯酶染色，活性和纯度分别达到95%时，调细胞数为5×106，接种于48孔培养板中，每组8孔。　　124培养上清液细胞因子的检测于培养液中加入100mg/mlLps2滴，4h后收集培养上清，用于IL8、TNFα、IL10的测定。　　13统计分析计量资料用±s表示，采用SPSS120软件进行方差分析(SNK法)。　　2结果　　21慢性肝损伤结果　　211肝组织病理学变化肝组织病理学显示，模型组与药物组大鼠体肝组织均出现不同程度的弥漫性改变，肝内可见到大量的脂肪空泡(肝小

4、叶内含脂滴细胞/总细胞数>1/3)及肝细胞气球样变、小叶内和汇管区有大量的以单核细胞、淋巴细胞为主的炎性细胞浸润，但未见明显肝纤维化，表明慢性损伤大鼠发生脂肪肝炎；与模型组相比，药物组大鼠肝组织炎性细胞浸润明显减轻。　　212血清ALT的变化对照组为(615±126)u/L，而模型组与药物组ALT水平明显升高，分别为(2103±1054)，(1441±729)u/L，与对照组比较，P005。药物组与模型组比较，ALT水平显著下降，差异有统计学意义，P005。　　213血清IL

5、6、IL10、TNFα的变化(表1)随着动物发生慢性肝损伤，模型组与药物组IL6、TNFα水平明显升高，IL10则明显下降；药物组IL6水平明显低于模型组，而TNFα降低及IL10升高，差异无统计学意义。　　表1大蒜素对血浆胞因子的影响（略）　　注：与对照组比较,aP001；bP005；与模型组比较,cP005　　22枯否细胞的分离、培养结果　　221KCs形态的改变与对照比较分离KCs结果表明，对照组KCs体积较小，形态相对规整，胞浆突起纤细，胞浆内仅有少量空泡。而模型组K

6、Cs体积明显增大，核浆比例增大，胞浆突起明显增多、变粗、胞浆高度空泡化，吴典型的活化状态。　　222KCs分泌细胞因子的变化(表2)加入Lps后，模型组与药物组培养上清液中IL6、TNFα水平明显高于对照组，IL10、水平发生明显下降。药物组与高脂组比较IL6、TNFα水平显降低，而IL10水平显著升高。　　表2大蒜素对大鼠KCs培养上清液细胞因子的影响（略）　　注：与对照组比较，aP001，bP005；与模型组比较，cP001，dP005　　3讨论　　近年来，非酒精性脂肪肝炎发病

7、率明显增高，尽管该病的发生机制尚未完全阐明，但对先天肥胖性ob/ob小鼠和fa/fa大鼠研究表明，KCs分泌功能紊乱参与了疾病的发生。其自然发展成为脂肪肝，特征有胰岛素抵抗、肥胖、脂质代谢紊乱，与人类的非酒精性脂肪肝炎直接相关〔１〕。Yang等〔２〕提出肥胖个体枯否细胞功能紊乱可以增加肝细胞对内毒素的敏感性，从而加速脂肪肝炎的形成。对肥胖、瘦素受体功能紊乱的大鼠、小鼠枯否细胞体外培养发现，枯否细胞表型异常，在给予内毒素刺激后与对照比较，促炎因子IL6、TNFα表达增加，而抑炎因子IL10表达抑制〔３

8、〕。尽管肝脏各种细胞均可产生TNFα，但普遍认为内毒素活化枯否细胞是TNFα产生的主要来源。研究表明，TNFα在脂肪肝炎的发生、发展中起了重要作用，其不仅可通过活化受体，产生各种适应性蛋白、促进肝细胞的抗凋亡〔４〕，也可引发肝细胞线粒体释放出活性氧引起肝细胞死亡、凋亡和肝脏的炎病浸润。IL6是肝脏KCs产生的另一种重要促炎因子，可与TNFα在协同促进肝内炎症的产生。相反IL10可通过抑制各种促炎因子的生成，从而减少