毛乳头体内再生诱导模型的建立

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1、硕士学位论文题目毛乳头体内再生诱导模型的建立英文题目Modelofdermalpapillaeregenerationinvivo姓名陈先才学号YX10001所在学院医学院导师姓名林常敏专业病理学与病理生理学入学日期2009.9.1答辩日期2012.5.31学位论文原创性声明本论文是我个人在导师指导下进行的工作研究及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在论文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。作者签名：日期：年月日学位论文使

2、用授权声明本人授权汕头大学保存本学位论文的电子和纸质文档，允许论文被查阅和借阅；学校可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存和汇编论文；学校可以向国家有关部门或机构送交论文并授权其保存、借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容。对于保密的论文，按照保密的有关规定和程序处理。作者签名：导师签名：日期：年月日日期：年月日汕头大学医学院硕士学位论文中文摘要目的1、建立单个大鼠触须毛囊上段裸鼠皮下移植方法，利用大鼠触须毛囊培养液作为促进毛乳头（dermalpapilla，DP）再生的诱导来源，建立DP体内再生诱

3、导模型；2、追踪DP再生的完整过程，观察毛囊培养液对DP再生率的影响；3、追踪模型中新生DP的细胞来源；4、选取与毛囊真皮成分发生密切相关的Wnt5a信号分子：①追踪wnt5a在DP再生过程中的时空表达；②观察wnt5a在大鼠DP胚胎发生前后的表达模式；②对比DP体内诱导模型与大鼠DP胚胎发生过程Wnt5a的表达模式，初步探讨DP再生机制。方法1、DP体内再生诱导模型制作①大鼠触须毛囊上段移植体的制作和鉴定：用显微器械肉眼分离得到SD大鼠触须毛囊，以镊子轻轻夹住毛囊上端并挤压，暴露毛囊下端红色的含毛乳头的毛球部，镜下紧贴毛球部上方用新剃须刀片将其横向裁

4、切，得到大鼠触须毛囊上段标本。随机抽取大鼠触须毛囊上段标本和切除的毛球部，扫描电镜观察是否完整切除毛球部。②毛囊培养液的应用：取大鼠触须毛囊上段标本时，挑选出移植用的生长期毛囊，其余毛囊（100-140个），加入含10%血清DMEM培养基培养，隔天换液。第2、4、6、8天换液时留取旧液用灭酶的小管保存，1h内裸鼠注射，注射于裸鼠毛囊移植点皮下，0.1ml/移植点。③单个大鼠触须毛囊上段裸鼠皮下移植：实验组：毛囊上段移植体用毛囊移植笔以30-45度角注射于裸鼠皮下，每个毛囊距离1-1.5cm，背部左右两侧各三个。移植后第2，4，6，8天分别注射毛囊培养液

5、；对照组：移植方法同实验组，但移植后第2，4，6，8天分别注射含10%血清的DMEM培养液。移植后定期拍照、取材、制作石蜡切片，观察形态学变化。2、新生DPC来源追踪①分组：毛囊上段BrdU浸泡标记组：大鼠触须毛囊用含5μmol/LBrdU的10%血清DMEM培养基浸泡4小时后再切除毛球部，裸鼠皮下移植；大鼠BrdU标记组：每隔2小时对大鼠腹腔注射5mg/kg的BrdU，连续注射4次后处死大鼠，取触须毛囊，切除毛球部后进行裸鼠皮下移植；I汕头大学医学院硕士学位论文BrdU裸鼠注射标记组：正常大鼠毛囊切除毛乳头后进行裸鼠皮下移植，取材前2h裸鼠腹腔注射5

6、mg/kg的BrdU，2h后处死取材。②定期取材，制作石蜡标本并切片，荧光免疫组化追踪BrdU的表达情况。3、Wnt5a在大鼠毛囊胚胎发生和大鼠触须毛囊上段裸鼠移植诱导DP再生模型中表达的对比①荧光免疫组化法观察wnt5a在大鼠触须毛囊上段裸鼠移植诱导DP再生过程的时空表达情况。②大鼠DP胚胎发生过程Wnt5a的表达模式：分别取E12.5、E13.5、E14.5、E15.5胎龄的大鼠胚胎，固定、制作蜡块、切片，HE染色观察表皮和真皮形态变化，免疫组化观察wnt5a表达情况及时间变化趋势。③对比DP体内诱导模型与大鼠DP胚胎发生过程Wnt5a的表达模式，

7、初步探讨DP再生机制。结果1、DP再生模型制作①大鼠触须毛囊上段切除效果鉴定：电镜扫描结果显示，毛囊切面光滑，切除方法效果良好，外层有结缔组织鞘包裹整个毛囊结构，内部可见外根鞘包裹毛根，未见毛乳头。由于毛乳头部位无毛根，因此可以确定毛乳头已被完全切除。②DP再生诱导模型形成过程观察：移植术后的裸鼠背部可见移植点距离均一，伤口微小，流血少，伤口恢复迅速。至第3天移植部位周围皮肤长出细密毛发。第22天在其中一个移植点观察到一根触须样的毛发纤维。大鼠处死后观察：移植的毛囊上段没有移位。移植的毛囊上段已向下生长形成完整的毛球部，毛球部形态与触须毛囊相似。毛囊周

8、围血供丰富，毛囊上段可见一条类似毛球部血供的红色线状结构，轻轻挤压此结构，可见毛囊下端突出于红