椒样薄荷病毒种类的分子鉴定及检测研究

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1、分类号：密级：学号：2009107065单位代码：10759石河子大学硕士学位论文椒样薄荷病毒种类的分子鉴定及检测研究学位申请人郝小军指导教师黄家风申请学位门类级别农学硕士学科、专业名称植物病理学研究方向植物病毒及病毒病害所在学院农学院中国·新疆·石河子2012年06月TheMolecularIdentificationandDetectionofPeppermintVirusesADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInPartialFulfillmentoftheRequirementsfor

2、theDegreeofMasterofAgricultureByHaoxiao-Jun(PlantPathology)DissertationSupervisor:Prof.HuangJia-fengJun，2012石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。研究生签名：时间：年月日使用授权声明本人

3、完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文用于赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅。有权将学位论文的内容编入有关数据进行检索。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日摘要椒样薄荷是新疆的一种香料植物，随着种植年限的增加，椒样薄荷精油品质和产量逐渐下降。本实验对椒样薄荷病毒进行了分子鉴定，并建立相应的检测方法，为椒样薄荷无毒化栽培及生产提供理论基础。从田间采集表现明

4、显病毒症状的椒样薄荷病株，采用纤维素（CF-11）层析方法，对椒样薄荷植株中的病毒dsRNA进行分离，利用改进的单引物法扩增到一段约400bp产物，然后对其进行克隆与测序。得到该片段核苷酸序列为352bp，序列分析表明为黄瓜花叶病毒（CMV）1a基因的部分序列，与其它已报道CMV1a基因序列同源性高达96%。根据所获病毒信息，设计了3对针对CMV2a基因、2b基因和CP基因特异性引物，对病株进行了相应目标基因的RT-PCR，结果均扩增到预期的目标片段。利用间接ELISA从186个样品中检测出3个样品呈阳性。并利用免疫反转录PCR（IC-RT

5、-PCR）从分离物MP1中检测到CMV，通过体系优化，建立了针对CMV的-6IC-RT-PCR检测体系，该体系病毒粗提液的稀释限点为10。根据CMVRNA3基因组全长设计特异引物从分离物MP1中扩增到目标片段，将其进行克隆和测序，得到2189个核苷酸，序列分析表明，该序列与其它已报道CMVRNA3组分核苷酸序列同源性达到90%以上；包含2个分别编码3a基因和CP基因的开放阅读框。3a基因为838个核苷酸，编码一个由279个氨基酸组成的蛋白质（分子量为30.6kDa），与其它已报道CMV的RNA核苷酸同源性为93.4%～96.9%，氨基酸同源

6、性为95.4%～99.1%。CP基因为657个核苷酸，编码一个由218个氨基酸组成的蛋白质（分子量为24kDa），与其它已报道CMV的RNA核苷酸同源性为93.9%～96.8%，氨基酸同源性为97.7%～99.1%。基于CMV基因组RNA3上的3a基因和CP基因构建系统关系树，来自伊犁椒样薄荷的CMV与来自福建的PE分离物关系最近，位于同一个进化分支。关键词：椒样薄荷；双链RNA；分子鉴定；检测；黄瓜花叶病毒IIIAbstractThepeppermint(Menthapiperita.L)isoneofimportantaromaticc

7、ropinXinjiang.Inrecentyears,thethequalityandyieldofpeppermintessentialoilhasdecreasedgradually.Inthisstudy,virusspeciesfrompeppermintwasidentifiedbymoleculartechnique,andmethodfordetectingvirusinfectionwasestablished.Fieldsamplesshowingredandmosaicsymptomswerecollectedfrom

8、Yili.DoublestrandRNA(dsRNA)wereextractedfromleavesusingCF-11chromatographymethod.Amodifie