梗阻性黄疸及胆汁引流方法对大鼠肠道siga的影响

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1、南开大学硕士学位论文梗阻性黄疸及胆汁引流方法对大鼠肠道sIgA的影响姓名：葛存锦申请学位级别：硕士专业：临床医学指导教师：李闻2012-05摘要研究背景：梗阻性黄疸患者易发生内毒素血症、术后感染等并发症，提示梗黄可损伤机体免疫防御功能。既往研究提示梗阻性黄疸可损伤肠黏膜机械屏障，肠黏膜通透性增加，内毒素吸收入血导致败血症的发生。梗黄对肠黏膜免疫屏障的影响成为近来的研究热点，分泌型免疫球蛋白(sIgA)是维持肠道黏膜免疫的主要免疫球蛋白，是肠道黏膜免疫的第一道防线，梗阻性黄疸能降低肠道内slgA含量，损伤肠黏

2、膜免疫屏障。但关于胆汁内外引流能否改善梗黄大鼠肠道内的低sIgA状态及胆汁内引流术与外引流术的优劣性，目前尚无相关报道。肠道内sIgA来源于肠道自身分泌和胆汁，肠道自身来源的sIgA形成需经过两个步骤：一、肠黏膜固有层IgA+浆细胞合成IgAmRNA经蛋白翻译过程分泌IgA，通过J链连接形成二聚体IgA；二、二聚体IgA经过肠黏膜上皮细胞表达的多聚免疫球蛋白受体(plgR)转运至肠腔，经蛋白酶水解，pI业的胞外片段(SC)脱落与二聚体IgA形成具有稳定结构和功能的slgA。目前关于梗阻性黄疸及胆汁引流影响肠

3、道内slgA的机制尚无相关报道。研究目的：探讨梗阻性黄疸及胆汁内外引流术对肠道内sIgA的影响，进一步比较胆汁内引流术与外引流术在恢复肠道内slgA含量，增强黏膜免疫功能方面的优劣性，探讨梗黄影响肠道内sIgA含量的初步机制。材料与方法：采用成年雄性SD大鼠60只，随机分为四组，分别建立梗阻性黄疸(OJ=15)、胆汁外引流(ED=15)、胆汁内引流(ID=15)、假手术(SH=15)模型。实验第一天进行胆管结扎切断术和假手术分别建立0J和SH模型，实验第八天留取OJ和SH标本，对OJ大鼠分别进行胆汁外引流术

4、和胆汁内引流术，第十五天留取ED和ID标本。取近段空肠5cm肠段内容物，离心取上清液通过双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠肠道内sIgA含量。通过RT-PCR方法测定近段空肠黏膜内IgAmRNA和plgRmRNA相对表达量的变化分别反映IgA的肠道合成过程和肠道自身转运过程，预测sIgA的肠道来源的变化。结果：梗阻性黄疸形成后，大鼠肠道内slgA含量较假手术组明显降低(OJ=14．97±1．62ug／ml，P=0．001vsSH=17．71±1．95ug／m1)，胆汁外引流术不能恢复肠道内sIg

5、A含量(ED=15．88±1．77ug／ml，P=0．187VSOJ)，而胆汁内引流术能逆转肠道内的低sIgA状态(ID=17．32±1．75ug／ml，P=0．596VSSH)，胆摘要汁内引流在恢复肠道内sIgA方面优于外引流(P=0．048，IDVSED)。OJ组大鼠的肠黏膜IgAmRNA(OJ=0．666±0．184，P=0．047，VSSH=0．478±0．186)和pIgRmRNA(OJ=0．642±0．188，P=0．014，VSSH=0．415±0．161)表达增强；接受胆汁外引流的ED组大鼠

6、IgAmRNA(ED=0．652±0．134，P=0．863，VSOJ)和pIgRmRNA(ED=0．599±0．152，P=0．598，VSOJ)与OJ组相比无明显变化；而内引流组大鼠的IgAmRNA(ID=0．459±0．162，P=0．014，VSED；P=0．824，VSSH)和pIgRmRNA(ID=0．439±0．133，P=0．03，VSED；P=0．731，VSSH)表达量明显下降，几乎恢复至SH水平。【结论】梗阻性黄疸可明显降低大鼠肠道内sIgA含量，影响肠道黏膜免疫屏障功能，胆汁内引流可

7、有效改善肠道的低slgA状态，而外引流作用不明显，胆汁内引流术在恢复肠道内slgA含量，维持黏膜免疫功能方面优于胆汁外引流术；梗阻性黄疸影响肠道内sIgA含量并非通过影响肠道合成IgA及pIgR蛋白数量的变化，从而影响肠黏膜对IgA的合成及转运过程起作用，肠道来源并非肠道slgA变化的主要原因，梗阻性黄疸可能是通过影响sXgA的H_H}t来源途径而影响肠道内sIgA含量。关键词：梗阻性黄疸胆汁内引流胆汁外引流sXgApIgRAbstractBackground：patientswithobstructive

8、jaundicehaveahighincidenceofsepticcomplicationsduetotheimpairedimmunedefencesystems．Previousresearchshavedemonstratedthedysfunctionofintestinalbarrierthatiscomposedofmechanicalbarrier,immunologicalbarrier,and