木天蓼改善敏感性皮肤红斑机制的研究——木天蓼影响vegf分泌及作用机制的探讨

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1、河北医科大学硕士学位论文木天蓼改善敏感性皮肤红斑机制的研究--木天蓼影响VEGF分泌及作用机制的探讨姓名：吕国彦申请学位级别：硕士专业：皮肤病与性病学指导教师：高顺强201203中文摘要木天蓼改善敏感性皮肤红斑机制的研究——木天蓼影响VEGF分泌及作用机制的探讨摘要目的：敏感性皮肤是一种特殊的皮肤类型，易出现红斑、丘疹、脱屑、毛细血管扩张等客观症状。红斑的病理表现是真皮乳头层毛细血管网扩张而产生的红色斑疹，严重影响美观。血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfacto

2、r,VEGF)在皮肤主要由角质细胞分泌，具有促使血管新生、扩张以及增加血管通透性等活性。进一步研究表明：就血管扩张及通透性增高而言，VEGF121亚型较其他亚型作用明显，且很可能是造成炎症性皮肤病红斑的主要原因。因此我们考虑如果能减少VEGF的分泌或有效抑制其作用，将会达到改善皮肤泛红的功效。一氧化氮(Nitricoxide，NO)臣O血管舒张因子，广泛存在于动植物体内，它作为信号传导因子，发挥多种生理病理学作用，具有促进血管扩张，增加血管通透性等作用，是目前史上发现最强的舒血管物质之一。正常人皮

3、肤中，角质形成细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞都能产生NO，内源性NO在一氧化氮合酶(Nos)的作用下，由L．精氨酸氧化生成。NOS分为原生型(cNOS)和诱生型(iNOS)两种亚型，其中iNOS只在特殊情况下如：紫外线、n师．a、IL。113等多种炎症因子的作用下产生，故强调其病理作用明显。木天蓼属猕猴桃科植物，落叶缠绕藤本，其果实、枝叶、根均可入药。据研究，木天蓼中含有生物碱、木天蓼内酯、B．苯乙醇等多种成分。可用于治疗多种疾病。2007年韩国学者从木天蓼中分离出具有抗炎效应的活性成分ALA(a

4、lpha-linolenicacid)，能明显的降低浮肿，并通过进一步研究证实：ALA通过阻断NF．r．B和活化蛋白激酶途径(MAP融)来抑制iNOS基因的表达，进而降低NO的含量，降低血管的通透性来发挥抗炎作用。本研究着眼于敏感性肌肤的典型表现一红斑，定位于与血管扩张密切相关的VEGF，拟探讨：1)木天蓼对表皮角质细胞产生VEGF的影响，着重于是否抑制角质细胞产生VEGF；2)木天蓼是否可以通过抑制一氧化氮中文摘要烈O)的过量产生而拮抗VEGF121诱导的血管扩张及高通透性，从分子生物学水平上揭

5、示木天蓼改善皮肤红斑的作用机制，为研发缓解皮肤泛红的新型植物护肤品提供科学依据。方法：1木天蓼有效成分的提取。2采用细胞体外培养技术研究木天蓼对角质细胞分泌VEGF的影响(1)正常角质细胞体外培养；(2)采用不同浓度的木天蓼粗提取液对角质细胞进行刺激，24小时后将培养基回收，应用ELISA技术检测培养基中VEGF的浓度，并选定木天蓼的最佳作用浓度；(3)采用木天蓼的最佳作用浓度对角质细胞进行刺激，于不同时间将培养基回收，应用ELISA技术检测培养基中VEGF的浓度，选定木天蓼的最佳作用时间；(4)

6、MTT法测定不同浓度药物作用下的细胞活力，检测不同提取物不同浓度对角质形成细胞是否有毒性反应。(5)分析木天蓼是否抑制角质细胞产生VEGF3木天蓼对VEGF121诱导NO过量产生的影响：(1)正常血管内皮细胞的体外培养；(2)采用含有2％血清浓度的培养基分别作为对照；(3)采用VEGF121、VEGF121+木天蓼、2％血清的培养基对细胞进行刺激；亚硝酸盐还原法检测木天蓼对一氧化氮附O)的过量产生是否有抑制作用。(4)确定木天蓼是否抑制NO的过量产生。4统计分析应用SPSSl3．0软件进行统计学分

7、析，数据表示用均数4-标准差(耻SD)，多个均数的比较使用随机区组的方差分析(ANOVA)，不同时间点上均数的比较采用重复测量(repeatedmeasure)的方差分析，对不满足正态和方差齐性条件的样本量偏小的计量资料，采用非参数检验(Nonparametrictest)的方法，p<0．05为有显著性差异，具有统计学意义。结果：l不同浓度的水溶性提取物(APW)和醇溶性提取物(APE)对人角质形成细中文摘要胞(HEK)分泌VEGF的影响：(1)应用ELISA方法检测培养基中不同浓度的APW和AP

8、E刺激下的VEGF水平：结果显示不同浓度APW和APE刺激下VEGF的水平有明显的差异，501工g／ml、10099／ml、200pg／ml的APE分别为(0．3534-0．069、0．183士0．015、0．183+0．015)与同剂量APW(0．353+0．069、0．183士'-0．015、0．183士0．015)pg／ml相比，差异具有统计学意义(FO．05)，与对照组(O．541士0．012)pg／ml相比具有显著性差异◇