拉米夫定对人乙肝病毒相关肝癌细胞放射敏感性的影响及机制研究

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1、南昌大学硕士学位论文拉米夫定对人乙肝病毒相关肝癌细胞放射敏感性的影响及机制研究姓名：彭玲珍申请学位级别：硕士专业：肿瘤学指导教师：刘安文201205摘要目的：研究抗病毒剂拉米夫定对人乙肝病毒相关肝癌细胞株HepG2．2．15细胞的放射增敏作用，并初步探索其可能的增敏机制。方法：通过荧光定量PCR法检测不同浓度拉米夫定(0，2．5，5，10，2599／mL)对人乙肝病毒相关肝癌HepG2．2．15细胞的病毒抑制效果；采用平板克隆形成实验观察拉米夫定对HepG2．2．15细胞株放射敏感性的影响；运用流式细胞仪检测HepG2．2．15细胞的凋亡率及

2、细胞周期分布变化；利用RT．PCR法、细胞免疫组化法及WesternBlot法分别检测CyclinDl在HepG2．2．15细胞中表达水平的变化。结果：荧光定量PCR法检测结果显示，拉米夫定可抑制HepG2．2．15细胞内乙肝病毒的复制，且在1099／mL作用48h时抑制效果最佳；平板克隆形成实验显示拉米夫定可显著降低照射后HepG2．2．15细胞的克隆形成率，其放射增敏比(SER)为1．224；流式细胞仪检测显示拉米夫定联合照射作用HepG2．2．15细胞后表现为凋亡率增加，GO／G1期细胞比例增多p<0．05)；拉米夫定联合照射后，细胞内

3、CyclinDlmRNA及CyclinDl蛋白的表达水平均下调。结论：抗病毒剂拉米夫定在体外抑制乙肝病毒复制的同时能增强HepG2．2．15细胞的放射增敏感性，其增敏机制可能与拉米夫定下调CyclinDl表达引起GO／G1期阻滞及增强放射诱导的细胞凋亡有关。关键词：HepG2．2．15细胞；拉米夫定；CyclinDl；辐射耐受性AbstractABSTRACTObjective：Toexploretheeffectofantiviralagentlamivudineinenhancingtheradiosensitivityofhumanhe

4、patitisBvirus-relatedhepatocellularcarcinomacelllineHepG2．2．15cellandpreliminarilyinvestigatethepossibleradiosensitizingmechanisms．Methods：FluorescentquantitativePCRassayfordetectionofvirusinhibitoryeffectoflamivudine(0，2．5，5，10，25I．tg／mL)inhepatitisBvirus-relatedhepatocell

5、ularcarcinomaHepG2．2．15cells；TheinfluenceoflamivudineontheradiosensitivityofHepG2．2．15cellsweredetectedbycolonyformationassay；TheapoptosisrateandchangeincellcycleofHepG2．2．15cellswereexaminedbyflowcytometry；RT-PCR，CellimmunohistochemicalandWestemblotwereusedtodetecttheexpre

6、ssionleveIofCyclinD1inHepG2．2．15cells．Results：FluorescencequantitativePCRdetectionresultsshowedthatlamivudinecaninhibitthereplicationofthehepatitisBvirusinHepG2．2．15cells，andthebestinhibitioneffectinlOlag／mLat48h；colonyformationassayshowedthatlamivudinesignificantlyreducedt

7、heclonogenicrateofHepG2．2．15cellsafterirradiationwithaSERof1．224；FlowcytometryanalysisshowedthattheproportionofG0／G1phaseandtheapoptosisrateincreasedinthegroupoflamivudinetreatwithirradiationp

8、clinD1proteininHepG2．2．15cells．Conclusion：Antiviralagentlamivudinecouldbothinhibit