抗人igm抗体抑制鼻咽癌hne-1细胞裸鼠成瘤的机制研究

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1、中图分类号：R739.63硕士学位论文抗人IgM抗体抑制鼻咽癌HNE-1细胞裸鼠成瘤的机制研究院（系）、所临床医学院研究生姓名冯杨学科、专业耳鼻咽喉喉学导师姓名覃纲教授二Ο一二年四月目录1抗人IgM抗体抑制鼻咽癌HNE-1细胞裸鼠成瘤的机制研究………………………………………………………………11.1中文摘要………………………………………………………11.2英文摘要………………………………………………………41.3前言……………………………………………………………81.4材料与方法……………………………………………………121.5结果…………………………………………………

2、…………171.6讨论……………………………………………………………251.7结论……………………………………………………………321.8参考文献………………………………………………………331.9英汉缩略词对照表……………………………………………392致谢……………………………………………………………403血管生成与鼻咽癌靶向治疗进展（综述）……………………42抗人IgM抗体抑制鼻咽癌HNE-1细胞裸鼠成瘤的机制研究摘要目的：目前，随着各种诊断方式的更新及治疗方法的进步，鼻咽癌的5年生存率有了一定提高但是仍不理想，早期诊断仍较困难，治疗效果仍欠佳。在前期研究中，我们发

3、现免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig）M在多种头颈部肿瘤包括鼻咽癌中存在广泛表达，利用抗人IgM抗体干预后，人鼻咽癌HNE-1细胞裸鼠移植瘤的生长受到明显抑制，并能促进其凋亡。Ig对人鼻咽癌HNE-1细胞裸鼠移植瘤具有生长因子样作用，能够促进其生长，但其[1,2]具体机制还尚不明确。随着对肿瘤形成机制的深入研究，人们发现血管生成与肿瘤的生长转移关系密切，抗血管生成治疗也成为肿瘤治疗中的重要组成部分之一。本实验是在前期研究的基础上，获取人鼻咽癌HNE-1细胞裸鼠移植瘤组织标本，通过检测移植瘤组织增殖指标以及血管生长相关指标，生存素-Survivin、增殖细胞核

4、抗原（proliferatingcellnuclearantigen，PCNA）、血管生成素-2（angiopoietin，Ang-2），移植瘤内微血管密度（microvesseldensity，MVD），进一步探讨抗人IgM抗体抑制人鼻咽癌HNE-1细胞裸鼠成瘤的可能机制，为鼻咽癌发病机制的研究及临床治疗方案提供新的思路。方法：取人鼻咽癌HNE-1细胞裸鼠移植瘤组织，用含1%蜂蜡的石蜡包埋组织，轮转式切片机将其切成4μm厚的病理切片，应用免疫组化链霉亲和素-生物素化过氧化酶复合物染色法（Streptoavidin-biotin-enzymecomplex，SABC）检

5、测瘤体组织中Survivin、PCNA、Ang-2表达情况；应用免疫组化链霉亲和碱性磷酸酶染色法-1-（Streptavidin-AlkalinePhosphatase，SAP）检测CD31标记的移植瘤内微血管，并计数MVD表达情况。（1）Survivin，PCNA：阳性染色呈黄色至棕黄色，前者主要位于胞膜或胞质；后者阳性染色部位主要位于细胞核。每张染色切片在OlympusBH2显微镜下，低倍镜（×100）随机选择染色明显的5个视野，高倍镜（×400）下采图，共5张切片，每张切片采集5张图片，采用Image-proPlus6.0软件对Survivin，PCNA阳性染色的

6、病理图片作免疫组化半定量分析，记录平均光密度值。（2）Ang-2：Ang-2阳性染色呈棕黄色，主要位于细胞浆或细胞膜。由两位医师分别观察每张切片，选择有代表性的区域，用OLYMPUSBH2显微镜在高倍镜下（×400）对切片进行摄像，共5张切片，每张切片采集5张图片，采用Image-proPlus6.0软件对采集的[16]Ang-2阳性染色切片作免疫组化半定量分析，记录平均光密度值。（3）MVD计数：阳性染色（CD31标记）呈鲜红色至红色颗粒，主要位于血管[18]内皮细胞膜，阴性染色为蓝色。计数方法参考Weidner的方法进行，先寻找染色清楚的瘤体内微血管，在染色密集区域

7、寻找（低倍镜，×40），然后在200倍镜（20×10）下计数肿瘤内的微血管数目，包括毛细血管和静脉数目，瘤旁组织内微血管不计数，记录5个视野内的微血管数，取平均值，结_果以（x±s）表达。统计数据运用SPSS16.0forwindows软件作统计学分析，P<0.05显示差异有统计学意义。结果：（1）Survivin、PCNA表达情况，抗人IgM抗体干预实验组Survivin、PCNA的平均光密度值分别为（0.153±0.009）、（0.084±0.025），IgG组Survivin、PCNA表达的平均光密度值为（0.221±0.019）、